对虾Taura综合症病毒Taqman实时定量RT_PCR检测方法的建立与应用.pdfVIP

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2017-09-02 发布于重庆
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对虾Taura综合症病毒Taqman实时定量RT_PCR检测方法的建立与应用.pdf

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第卷第期 , 30 2 中国预防兽医学报 Vol.30No.2 年月 2008 2 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Feb.2008 对虾Taura综合症病毒Taqman实时定量 RT-PCR检测方法的建立与应用 1 2 1 1 1 1 1 2 岳志芹 ,刘荭 ,梁成珠 ,高宏伟 ,雷质文 ,徐彪 ,朱来华 ,江育林 (1.山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,山东青岛 266002; 2.深圳出入境检验检疫局水生动物疫病国家重点实验室,广东深圳 518010) 摘要:建立了实时定量方法检测对虾的综合症病毒 , 。 Taqman RT-PCR Taura (Taurasyndromevirus TSV) 选取TSV基因组的保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计引物和探针,扩增产物长度为 73bp。以含有TSV 目的扩增片段的质粒为标准品,进行实时定量反应,结果表明质粒在 6个拷贝,共个 RT-PCR DNA 6～6×10 7 数量级的范围内有 “ ”型扩增曲线。根据病毒拷贝数与值制备了标准曲线,可以用于病毒的定量分析。该方 S Ct 法的检测灵敏度为个病毒粒子。该方法的重现性好,组内的实验变异系数为 ,组间实验变异系 6 0.04%～2.70% 数为 0.92%～4.67%。引物和探针对于对虾基因组 RNA、黄头病毒 RNA都没有扩增反应,表现出良好的特异性。实时定量RT-PCR检测TSV方法的建立,对于虾病的临床诊断及流行病学研究具有重要意义。关键词: ;实时定量 ; 探针 TSV RT-PCR Taqman 中图分类号:S945.4 文献标识码:A 文章编号:1008-0589(2008)02-0141-04 DevelopmentandapplicationofTaqmanreal-timequantitative RT-PCRassayfordetectionoftaurasyndromevirusinshrimps 1 2 1 1 1 YUEZhi-qin,LIUHong,LIANGCheng-zhu,GAOHong-wei,LEIZhi-wen, 1 1 2 XUBiao,ZHULai-hua,JIANGYu-lin (1.ShandongTechinicalCenter