布鲁氏菌S2WboA基因缺失株的构建及免疫效果.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(8):2448-2453 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.033 布鲁氏菌S2 WboA 基因缺失株的构建及免疫效果 丁家波，程君生，牟 巍，毛开荣，张尔利，蒋玉文 （中国兽医药品监察所，北京 100081 ） 摘要：【目的】WboA 基因编码光滑型布鲁氏菌脂多糖（LPS）O－侧链合成必须的糖基转移酶，该基因的缺失 或破坏会影响布鲁氏菌光滑型表型的形成。本研究拟构建 WboA 基因缺失的重组粗糙型布鲁氏菌，以使布鲁氏菌弱 毒疫苗与野毒株布鲁氏菌感染相区分。【方法】以猪源光滑型布鲁氏菌 S2 株为研究对象，通过同源重组将氯霉素 抗性基因（ r Cm ）完全替代S2 株的WboA 基因，获得重组粗糙型布鲁氏菌rS2-WboA株。【结果】rS2-WboA株在适宜 的培养基（TSA）上传 50 代后仍保持对氯霉素的抗性。用 1×107 CFU rS2-WboA 免疫 Balb/c 小鼠和豚鼠，1 个月 后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体。1×1011 CFU rS2-WboA 菌攻毒 Balb/c 小鼠后，不会引起死亡，并且 能抵抗 200 CFU 强毒 M28 的攻击。小鼠试验显示了 rS2-WboA 与原始株 S2 相似的保护性和更高的安全性，其保护 性也略高于另一重组株rS2-WbkC。【结论】 WboA 可作为构建重组粗糙型布鲁氏菌疫苗株缺失的靶基因。 关键词：布鲁氏菌；WboA 基因；免疫性 Construction of a WboA-Deficient Brucella suis S2 Strain and Its Immune Effect DING Jia-bo, CHENG Jun-sheng, MU Wei, MAO Kai-rong, ZHANG Er-li, JIANG Yu-wen (China Institute of Veterinary Drug Control, Beijing 100081 ) Abstract: 【Objective 】 WboA gene encodes a glycosyl transferase, an enzyme essential for the synthesis of O antigen. Disruption of the WboA gene in smooth B . abortus and B . melitensis results in rough, attenuated mutants which fail to produce the O polysaccharide (O antigen). In this study, whether the wboA gene disruption is responsible for the rough phenotype of B. suis 2 strain (S2) was explored. 【Method 】Chloramphenicol resistance gene （Cmr ）was cloned into the genomic DNA of S2 by homologous recombination with knocking out the WboA gene, and the recombinant rS2-WboA was obtained. 【Result 】 rS2-WboA was conversed into rough-phenotype from smooth-phenotype.