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Nov. 2006 生 物 加 工 过 程 4 4
!12 ! Chinese Journal of Bioprocess Engineering 2006 11
李 兵, 庄国强, 林建强, 曲音波
( 山东大学 微生物技术国家重点实验室, 济南250100)
:将PCR 扩增得到的瑞氏木霉纤维素内切酶 (Endo1, 4glucanase ,EG ) 基因片段插入巴斯德毕赤酵
母( P ichia p astoris )质粒pPIC9K , 构建了EG的分泌表达质粒pPIC9Keg3, 然后经线性化后电转化导入 P p astoris
GS115 受体菌 获得的阳性克隆经SDSP GE 和酶活检测,证明工程菌株发酵上清液 含有表达的EG 蛋白并
具有纤维素内切酶酶活通过荧光定量PCR确定了各菌株的拷贝数并对不同拷贝数范围的菌体生长和EG的表
达做了比较实验结果表明,低拷贝重组菌有着相对较好的EG表达量
: 内切纤维素酶EG; 巴斯德毕赤酵母;表达; 拷贝数
:Q7 S963327 : : 1672- 3678(2006)04- 0012- 05
The effect of Trichoderma reesei cellulase EG s copy number
to its expression in Pichia p astoris
LI Bing,ZHU NG Guoqiang,LIN Jianqiang,QU Yinbo
( State Key Laboratory of MicrobialTechnology, Shandong University,Jinan 250100,China)
Abstract :The endobeta1,4glucanase (EG) gene (EG) was amplified from fungus Trichoderma reesei
using PCRthehnique. The EG was inserted into pPIC9K, a Pichiap astoris vector, toyield the recombinant
secrete plasmid pPIC9Keg3. The pPIC9Keg3 was transformed into P. p astoris GS115. The EG was ex
pressed and secreted into thebroth. The insert genels copy number in host genomic DN were detected by FQ
PCR. The cellgrowth and EG activity of recombinantwith different copies of inserted EG were analyzed.
The resalts suggest that the strain with single copy showed better EG expressis than the strains with higher
gene copy numbers.
Key words: endoglucanase EG; Pichia p astoris ;expression;copy number
,
,
, P p astoris
,
7 , ,
P p astoris
:
: 国家973 项目( No2003CB716000) ; 国家自然科学基金项目(N ; 山东大学微生物技术国家重点实验室开放基金项目
:李 兵( 1977) , 男, 山东省泰安市人, 在读
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