甲3型流行性感冒病毒环介导逆转录等温扩增检测方法的建立与应用.pdfVIP

·242· CHINESE 0FVACCINESANDIMMUNIZATl0NV01．14No．32008 JOURNAL 甲3型流行性感冒病毒环介导逆转录等温扩增检测方法的建立与应用 姜晓慧，陈寅，卢亦愚，严菊英，冯燕，徐昌平，李榛，周敏，李敏红 (浙江省疾病预防控制中心浙江省公共卫生应急检测关键技术重点实验室，杭州 310009) 摘要：目的 建立适用甲。型流行性感冒(流感)病毒核酸检测的环介导逆转录等温扩增(RT_LAMP)方法，为基层 实验室流感快速诊断服务。方法 对甲。型流感病毒设计两对环介导特异性引物与一个环引物，采用环介导RT- LAMP技术对甲。型流感病毒核酸进行等温扩增，并对反应体系进行优化。结果采用RT-LAMP技术检测甲s 型流感病毒核酸，敏感度可达O．01TCID5。／反应，与荧光定量逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)的敏感度相一致，且 对H。和H。亚型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、风疹病毒、流行性腮腺炎病毒、副流感病毒 与腺病毒无交叉反应，具有良好的特异性。采用该方法检测58份临床样本，病毒分离的阳性率为37．9％，而荧光 甲。型流感病毒环介导RT-LAMP检测方法，不仅快速特异、敏感性强，而且简便价廉，适于基层实验室使用。 关键词：环介导逆转录等温扩增；甲。型流行性感冒病毒；荧光定量逆转录一聚合酶链反应 中图分类号：R373．13文献标识码：A 文章编号：1006—916X(2008)03一0242一04 and of IsothemaI Detec。 Assay(LAMP)for DevelopmentAppHcationLoop—mediatedAmp¨fication tionofInfluenzaVirus JIANG Yin，LU H3 Xiao—hui，CHENYi—yu，Pf口Z．(Z^巧i口竹g夕rD口i咒一 Subtype finZ Cb以z，．oZ口，2d Ce竹￡rP．厂o，．Dis口口59 Prg口P竹缸。竹，H口咒gz^o“310009，Z^巧f口，zg，C^Z口) Abstract： To serviceof ofinfluenzaVirusinthelabatgrass objectiveprovide rapiddiagnosis rootlevel the isothermal todetectthenucleicacids bysettingup Loop—mediatedamplicationassey ofinfmenzavirus MethodsTwo of anda were sbutypeH3． pairsspecificprimersloopprimer ucIeicacidsofinfluenzaviruswere and designed．N H3 amplifiedusingreverse^transcriptionloop— mcdiatedisothermal reaction were amplificationtechnology(RT—LAMP)．Thesystemsoptimized． Results oftheRT—LAMPwas whichwasassameasthat Sensitivity assayO．