1人血清类胰蛋白酶含量测定方法的建立%3b2类胰蛋白酶引起ECV304细胞表达IL-1β、IL-8和SCF变化的机制研究.pdf

肥大细胞类胰蛋白酶促炎机制研究 中文摘要 第一部分 人血清类胰蛋白酶含量测定方法的建立 类胰蛋白酶是肥大细胞分泌颗粒中特有的一类四聚体丝氨酸蛋白酶，J下常情 况下仅有少量分泌，但在肥大细胞相关的疾病，如过敏性休克、哮喘、风湿性关 节炎、肥大细胞增多症等，可使肥大细胞脱颗粒，类胰蛋白酶大量释放，血清浓 度急剧升高。因此，检测血清中类胰蛋白酶的含量有助于相关疾病的诊断。正常 情况下，类胰蛋白酶在血中的含量非常低，国内目前还没有很好的检测手段。我 们制备并提纯了类胰蛋白酶的单克隆抗体，建立了较为敏感的双抗体夹心酶联免 疫吸附试验(ELISA)法，能够检测到正常人血清中的类胰蛋白酶，为国内此类疾 病的诊断提供了依据。 我们将能够分泌类胰蛋白酶的杂交瘤细胞株种植到balb／c小鼠腹腔，取其 腹水，用蛋白A亲和层析法提取抗类胰蛋白酶抗体，用酶联免疫吸附试验法检 测类胰蛋白酶的水平。并且对随机抽取的正常人血清标本，以及过敏性休克死亡 患者血清，使用ELISA法检测了类胰蛋白酶的水平。 过敏性休克死者血清的类胰蛋白酶含量明显升高(大于正常值50倍)。 我们制备并提纯了类胰蛋白酶的单克隆抗体，建立的ELISA法能够检测人血 清中类胰蛋自酶，获得了上海地区正常人类胰蛋白酶血清浓度，为肥大细胞相关 疾病的临床诊断提供了实验依据。 13 第二部分类胰蛋白酶引起ECV304细胞表达IL．1 和IL一8变化的机制研究 炎症反应不仅仅局限于传统的范围，在肿瘤、动脉粥样硬化以及神经退行性 病变等疾病的发生发展中也都有参与，并发挥了重要作用。因而，炎症在这些疾 病中是怎样发挥作用及其作用机制的重要性是目前迫切需要解决的问题。肥大细 胞分泌的类胰蛋白酶通过诱导血管炎症反应和促进炎症细胞在局部聚集，在炎症 反应中起了重要作用。内皮细胞不仅仅是一个作为被动分隔血液和周围组织的机 械屏障，由于处在血液和组织交接处，这使得它可以调节致炎物质的流入或流出 cell 炎症区域；内皮细胞还能够表达干细胞生长因子(stem 对肥大细胞具有很强的趋化作用，还可促使其增殖、分化、成熟、激活，因此内 皮细胞在炎症反应中具有非常关键的作用。类胰蛋白酶是通过激活内皮细胞膜表 等人报道PAR2的激活依赖于受体的基因结构，而且，缺少肝素的作用类胰蛋白 酶将会失去活性。因此，研究类胰蛋白酶、血管内皮细胞以及PAR2的激活与炎 症之问的相互关系以及阐明与炎症有关的疾病机制非常重要。 本实验用RT．PCR，Northernblot方法检测类胰蛋白酶刺激后内皮细胞炎症 cell 介质IL一1B、IL一8和干细胞生长因子(stem factor，SCF)表达情况，并用 Western—blot方法研究类胰蛋白酶对PAR2受体的激活作用。 结果表明，类胰蛋白酶能够激活人脐静脉内皮细胞膜的PAR2受体，促进人 mRNA、SCF B、IL一8 脐静脉内皮细胞的IL．1 mRNA表达上调，这些作用可以 被PAR2单克隆抗体所抑制。 类胰蛋白酶能够通过激活人脐静脉内皮细胞膜受体PAR2促进炎症介质 IL．1 B和IL一8表达，并通过产生SCF，促进肥大细胞在局部聚集和激活，加剧 局部炎症反应。 ABSTACT PARTlEstablishmentofanew detectiveof assay