小鼠蛛网膜下腔出血后胰岛素与PI-3 K_AKT信号通路的关系.pdfVIP

生 物 医 学 工 程 究 2叭4 oumalofBiomediealEngineeringReseareh … ‘ ～…102 J ，33(2)：98 ourHal 小鼠蛛网膜下腔出血后胰岛素与 PI一3K／AKT信号通路的关系 李晓晖，李香，滕伟 ，方建 ，陈文武 △ (1．河南大学第一附属医院，开封 475000；2．河南大学医学院，开封 475000) 摘要 ：观察胰 岛素在小鼠蛛 网膜下腔 出血后神经元凋亡作用的影响，并进一步探讨其 引起该作用的分子 机制。健康雄性昆明小鼠，体质量28～32g，清洁级 (SPF)，70只，随机分为三组：假手术组 (Sham组)，蛛 网 膜下腔出血+生理盐水组 (SAH组)，蛛网膜下腔出血 +胰岛素组(Ins组)，蛛 网膜下腔 出血 +胰岛素+ PD98059抑制剂组(PD组)。检测方法：(1)神经功能学检测，观察记录小鼠的精神状态、部分感觉和运动能 力；(2)HE染色观察小鼠顶叶皮质神经元的形态学改变；(3)RT—PCR检测 P—AKT、P—ERK的mRNA水 平表达情况；(4)Westernblot检测P—AKT、P—ERK的蛋白水平表达情况。结果表明：(1)神经功能学检测： 与对照组比较 ，小鼠SAH后感觉和运动能力呈现不同程度 障碍 ，综合得分明显下降；与 SAH组 比较 ，Ins组 感觉和运动能力相对较好，综合得分有所上升。(2)HE染色观察：Sham组小鼠神经元排列相对整齐，形态 较完整，核质均匀，核仁清晰；SAH组小鼠神经元损伤较重，部分细胞肿胀，排列紊乱，细胞周间隙增宽，部分 细胞核固缩深染。(3)RT—PCR结果显示：与Sham组 比较，SAH后6hP—AKT有所增加，同时P—ERK增 加 ，与 SAH组比较 ，Ins组 P—AKT增加更显著 ，且 P—AKT相对增加 ，与 Ins组比较 ，PD组 P—AKT明显减 少，P—ERK明显减少，且与SAH组比较亦有统计学意义。(4)WesternBlot结果显示P—AKT、P—ERK蛋 白 水平变化与mRNA水平一致。胰岛素可通过 PI3K—Akt信号转导途径明显抑制小鼠蛛 网膜下腔 出血后神 经元的凋亡，其中Akt激活以及ERK的增加是胰岛素上述抗凋亡效应的关键环节。 关键词：蛛网膜下腔出血；胰岛素；小鼠；抑制凋亡；P—AKT；P—ERK 中图分类号 ：R318 文献标识码 ：A 文章编号 ：1672—6278(2014)02-0098-05 TheRelationshipofInsulin andPI——3K ／AKT Pathwayafter M ouseSSpontaneousSubarachnoidHemorrhage LIXiaohui，LIXiang，TENG Wei，FANG Jian ，CHEN W enwu。 (1．TheFirstAffiliatedHospitalofHenanUniversity，Kaifeng475000，China； 2．DepartmentofClinicalMedicine，HeanUniversity，Ka ng47500)) Abstract：To investigate whether insulin playsarole in theanti—apoptoticin mousespontaneoussubarachnoid hemorrhage (SAH)，ifSO，whichsignalingstepsareinvolvedinthisprocess．SAHwasinducedinmaleWistarmousesbypunctureofinternalca— rotidartety．SeventymaleWistarmousewith28～32gwererandomlydividedinto4groups：Sham (contro1)group，SAHgroup，Ins (SAH十insulin)group，PD(SAH十insulin十PD98059)group．(1)Neur