半乳糖修饰大孔壳聚糖支架的制备及表征.pdfVIP

2454 功 能 材 料 2004 年增刊 （35 ）卷 半乳糖修饰大孔壳聚糖支架的制备及表征* ∗ 包志明，潘继伦，吴 晨，俞耀庭 (南开大学 分子生物学研究所，生物活性材料教育部重点实验室, 天津 300071) 摘 要：生物人工肝反应器中肝细胞的数量和功能是 学科学研究院提供；Trypan Blue ，上海化学试剂采购 能否有效替代已衰竭肝脏功能的关键，与此紧密相关 供应站；胶原酶IV ，Sigma Chemical Co.Ltd ；HEPES， 的是细胞支架材料结构和性能的优化。采用冷冻干燥 北京鼎国生物技术发展中心；新生牛血清，联星生物 法，制备了大孔壳聚糖支架，孔隙率在90% 以上，平 技术有限公司；庆大霉素，天津金耀氨基酸有限公司 均孔径在 100~200µm 之间。以肝细胞表面去唾液酸 2.2 壳聚糖大孔支架的制备 糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor ，ASGPR) 的特 将壳聚糖溶于 1%乙酸中配成 1.5%(w/v) 的壳聚 异性配体--半乳糖，对材料表面进行糖基化修饰，制 糖/ 乙酸溶液，向六孔细胞培养板每孔中加入 1mL， 备了半乳糖基修饰的大孔壳聚糖支架，肝细胞在其上 迅速盖好，4 ℃预冷3h ，再置于－28 ℃冷冻过夜后冷 生长状况良好，细胞培养密度高，为高密度培养肝细 冻干燥。以Matthew 所述的方法[3]对壳聚糖支架进行 胞提供了一种性能优良的支架材料。 水化，其后向六孔细胞培养板每孔加入浓度为 关键词：壳聚糖；半乳糖；冷冻干燥法；生物人工肝 36mg/mL 的半乳糖溶液。反应 2h 后，加入过量的 中图分类号：O636 文献标识码：A NaBH4 ，继续反应24h 。用蒸馏水洗至中性，再用pH7.4 文章编号：1001-9731 （2004 ）增刊-2454-03 的PBS 浸洗3 次，最后二次冷冻干燥。 2.3 孔隙率测定 1 引 言 [6] 孔隙率的测定使用Shen F 等提出的方法 ，通过 冷干前后支架重量的变化推算出孔隙率的大小。 杂化人工肝支持系统是近 30 年来发展起来的对 2.4 半乳糖基化反应程度的测定 肝功能衰竭进行治疗的一种很有前景的方法[1] ，但如 半乳糖基化反应程度的测定，使用Park IK 等提 何提高反应器内的肝细胞密度并维持其生理活性是 出的方法[7] ，利用核磁共振图谱中的峰的面积来计算 一个关键问题，也是进一步发展人工肝所面临的主要 出半乳糖基化反应程度。 任务之一[1,2] 。壳聚糖(chitosan)是甲壳素的脱乙酰化 2.5 原代大鼠肝细胞的分离与培养 产物，是一种兼具生物相容性和生物可降解性的晶形 选取250g 左右雄性Wistar 大白鼠，采用Seglen 高分子材料[3,4] ，而半乳糖则是肝细