几种病毒蛋白的晶体学相关研究.pdf

摘 要 病毒的调控蛋白在病毒的基因表达与调控过程中具有重要的作用。Borf一1 是牛泡沫病毒编码的唯一调控蛋白，能够反式激活位于长末端重复序列和env Disease 基因内部的启动子。JDVTAT是Jembrana Virus编码的反式调控因子 和牛疱疹病毒编码的调节蛋白可以促进病毒基因的表达。 本文以这上述四种蛋白为材料，经PeR构建表达质粒，并利用大肠杆菌进行 表达。通过对诱导条件的优化获得可溶性表达蛋白，结果Borf-i和ICPON端片断 在37℃即能够可溶性表达，而jDvTAT和BICPO需要进行低温诱导在18。C进行 可溶性表达。在此基础上根据不同蛋白的特性利用亲合层析，离子交换层析和分 子排阻层析等方法对蛋白进行纯化，通过优化条件，四种蛋白均获得较高纯度。 对于纯化效果理想的Borf一1进行结晶相关研究，运用动态光散射和圆二色 谱的方法对分子的均一性和二级结构进行测定。发现在溶液中Borf—l是以多聚 体的形式存在的，其二级结构中a螺旋的含量较低。利用气相扩散法进行Borf一1 的晶体生长，摸索晶体生长的条件。实验发现Borf一1在以聚y．--醇(PEG)作为 沉淀剂时，生成了类似晶体的沉淀，并在此基础上进行晶体生长条件的优化。 关键词：病毒调控蛋白，蛋白表达，蛋白纯化，气相扩散法，结晶 Abstract The ofviruses regulatoryproteins are inthe of important progress viral and geneexpression the regulation．Borf—l，encodedBovine by foamy transactivate virus·can the within the promoters terminal 5’long repeat and 3’endofCZ／V disease gene．JembranavirusTat isa protein can to transcriptional bindsRNAsiteTARand activator，which increases the of andBICPOareviral efficiency transcription．ICPO regulatory ofHSVandBHV proteins that the ofviral promot