超滤法分离提取鸡胸软骨中硫酸软骨素和Ⅱ型胶原蛋白.pdfVIP

亿亏与生物z程2011，VoI．28 No．2———————————————————————————————固 ChemistryBioengineering doi：10．3969／j．issn．1672—5425．2011．02．015 超滤法分离提取鸡胸软骨中硫酸软骨素和Ⅱ型胶原蛋白 李燕妮 (滨州医学院药学院，山东烟台264003) 摘 要：研究了超滤法分离提取鸡胸软骨中硫酸软骨素和Ⅱ型胶原蛋白的工艺。确定超滤工艺为：鸡胸软骨水解液 用截留分子量为10kDa的超滤膜。在0．3MPa、10℃截留得到硫酸软骨素，收率迭97．1％；超滤透过液用截留分子量为3 kDa的超滤膜，在0．6MPa、10℃脱盐浓缩，得到Ⅱ型胶原蛋白，收率迭95．1％。 关键词：鸡胸软骨；超滤；硫酸软骨素；Ⅱ型胶原蛋白 629．12538 028．8 中图分类号：0 Q TQ 硫酸软骨素(CS)是关节软骨处蛋白多糖形成所 必需的一类粘多糖，平均分子量为25～55kDa，主要 TFF 用于某些神经性头痛、神经痛、关节痛、偏头痛、动脉粥 可见分光光度计，惠普上海仪器有限公司。 样硬化以及由链霉素引起的听觉障碍及肝炎的辅助治 1．2方法 疗。实验表明，口服硫酸软骨素可以逐步缓解关节变 超滤法分离提取鸡胸软骨中硫酸软骨素和Ⅱ型胶 原蛋白的工艺流程如图1所示。 性病症状，减少对非甾体类抗炎药(NSAIDs)的依 赖u]。通常认为硫酸软骨素是通过提高内源性合成和 防止酶降解关节粘多糖来改善关节功能。 风湿性关节炎是人体常见的自身免疫性疾病，其 病因是T细胞对关节软骨的抗原反应所致。而Ⅱ型 胶原蛋白是关节软骨中的主要蛋白，因而是潜在的自 身抗原。鸡Ⅱ型胶原蛋白具有类似的抗原型，口服后 能诱导T细胞产生免疫耐受，从而抑制T细胞介导的 自身免疫性疾病。口服小剂量鸡Ⅱ型胶原蛋白可缓解 风湿性关节炎病人疼痛、僵直等症状[2]。 鸡胸软骨中富含硫酸软骨素和纯度较高的Ⅱ型胶 原蛋白[3]，与牛的气管软骨和鲨鱼软骨相比，去除鸡胸 肉后的鸡胸软骨非常容易收集。作者在此先用木瓜蛋 圈1超滤法提取鸡胸软骨中硫酸软骨素 白酶处理鸡胸软骨，然后采用超滤技术分离提取硫酸 和Ⅱ型胶原蛋白的工艺流程 Technicalofextractionofchondroitinsulfateand 软骨素和Ⅱ型胶原蛋白[4~6]。 Fig．1 process fromchickenkeel typeIcollagen cartilageby l 买验 1．2．1鸡胸软骨的水解 1-1材料、试剂与仪器 取1kg冷冻后的鲜鸡胸软骨，匀浆后加入5000 鸡胸软骨。 g(相当于 mL纯化水，调pH值至7．5～8．0，加入4．0 木瓜蛋白酶(Papain)；硫酸软骨素标准品，中国药 h， 鸡胸软骨质量的0．4％)木瓜蛋白酶于50℃水解6 品生物制品检定所；其它试剂均为分析纯。 min,水解液