第十五章 生物制品.pptVIP

一　病毒类疫苗的制造方法 1　毒种的选择与减毒 毒株须具备的条件： （1）持有特定的抗原性； （2）有典型的形态和感染特定组织的特性，并能保持其生物学特性； （3）易在特定组织中大量繁殖； （4）不产生神经毒素或能引起机体损害的其它毒素； （5）如制备活疫苗，繁殖过程中无恢复原致病性的现象； （6）未被其它病毒污染。 2　病毒的繁殖 （1）活体动物培养 （2）鸡胚培养 （3）组织培养 （4）细胞培养； 细胞培养时需要控制： ①　常用的维持液和生长液 　　需要氨基酸、辅酶、维生素、葡萄糖和无机盐等。 ② 培养条件控制 a pH值：7.0±0.2； b CO2提供：通过保持环境CO2分压5%，控制pH。 c 氧的提供：通氧； d 容器内壁洁净度控制：用硫酸－铬酸混合液洗涤，后用纯水冲洗； e 细菌污染控制：彻底灭菌，加入一定量抗生素； f 培养温度和时间控制：37±1℃，时间2－4天。 3　疫苗的灭活 　　用甲醛或酚溶液灭活。 　　动物组织对灭活效果有影响；灭活时间要合适。 5　冻干 　　冻干的疫苗充氮或真空密封保存。 重要的病毒类疫苗生产工艺 一、甲型肝炎减毒活疫苗 历史： 绒猴肝内复制； 细胞培养未经纯化； 细胞培养经纯化。 二　乙型肝炎疫苗 　　HBsAg抗原具有较强的免疫原性，可制备疫苗，用酵母表达系统。 三　流行性乙型脑炎疫苗 　　11-15日龄地鼠肾经胰酶消化，用大立瓶6-8r/h培养3d，用生理盐水充分洗涤，加入维持液，接入毒株鼠脑悬液，待病变达+++，第一次收液。细胞良好，待病变达++++作第二次收液。收液作毒力滴定与无菌实验，加入福尔马林，22℃恒温灭活8d。 六　白喉类毒素 1　菌种及培养基 　　菌种：白喉杆菌PW8株,第8号菌株。 　　培养基：改良马丁培养基，保浦氏培养基，改良林氏培养基。 2　培养 　　多用深层培养。 温度　34－35℃ pH　　7.0－7.6 糖量　用麦芽糖 通气量　充足 氮源　补加谷氨酸 时间　50h左右 3　脱毒方法 （1）温度　越高越快，但超过40℃会降低抗原性，一般采用37－39 ℃ ； （2）pH值　越高越快，但碱性会降低抗原性，一般采用7.0－7.5； （3）甲醛浓度 越高越快，但过高会导致高甲醛残留，且增加注射疼痛。 4　疫苗纯化 　　细胞培养换液即可。 病毒性细胞培养疫苗的制备 流程：种毒与毒种 →营养液配制与细胞制备 →接毒与收获→配苗 工序1 种毒与毒种 种毒由国家指定的菌、毒种保藏部门鉴定分发，多为冻干品。按规定在细胞中继代培养后用作毒种。继代培养控制在一定代数以内。 工序2 营养液配制与细胞制备 营养液通常分为细胞培养用的生长液和病毒增殖用的维持液，两者不同的是生长液血清含量为5％～20％，维持液血清含量仅有0％～5％。不同细胞需要不同的营养成分，根据需要选择合适的营养液。常用的营养液有乳汉液、MEM、DMEM、199、1640等，只需溶解后经除菌过滤即可使用。 工序3 接毒与收获 病毒接种可与细胞同步（分装同时或分装不久后接种病毒）或异步（细胞形成单层后接种病毒）。待出现70%～80%以上细胞病变时即可收获。收获时可将培养瓶反复冻融后收取；也可加EDTA-胰酶液消化分散收获。收获的细胞毒液经无菌检验、毒价测定合格后，供配苗用。 工序4 配苗 灭活疫苗和冻干苗的配制方法见禽胚培养疫苗。 疫苗《制造及检验规程》 任何一种疫苗都有其《制造及检验规程》，它是国家法定标准。 疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行生产和检验，若要改变方法，则要提供研究材料证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新《规程》才能进行生产。 《规程》来源 中华人民共和国《生物制品规程》（常规疫苗） 转让单位 五、疫苗质量控制及检定的要求 　　（一）生产过程中质量监控标准的建立及要求 　　在生产工艺的各个环节和步骤中的产品均应建立相应的监控标准，以便后续工艺的进行,保证产品的质量、工艺的稳定性。 （二）疫苗产品的质量检定与要求 　　 1．外观检查：根据样品的特征建立外观的质量标准。 　　2．pH值检测：可根据一般生物制品的要求建立标准，一般为7.2±0.5。 　　3．纯度：主要用于评价纯化制品中含有有效成分的量和杂质的最低限量，制定相应标准，通常可测定有效抗原在疫苗中的绝对值或测定主要杂质的量推算有效抗原在疫苗中的相对值。 　　4．宿主细胞 DNA和蛋白残留量检测：采用传代细胞生产疫苗，应限制疫苗中的宿主细胞DNA和蛋白残留量，进行方法研究时应建立相应的标准品，并对检测试剂的敏感性和特异性进行验证。疫苗中残余宿主细胞DNA及蛋白残留量可参考现行版《中国药典》的相关要求。 5.无菌检查：应