第十三章基因药物分析.pptVIP

? 空白和对照： 通过不加酶，或不加底物，或二者都加（但酶需经过失效处理）； 空白是指杂质反应和自发反应引起的变化量； 提供未知因素的影响。 对照是指用纯酶或标准酶制剂测得的结果，主要用于比较或标定。 ii) 常用方法有： 适当条件下 将酶和底物混合 ① 测定生成一定量产物所需的时间，即终点法 ② 隔一定时间，间断或连续地测定反应变化 ③ 反应一定时间后停止反应，定量测定底物减少或产物生成的量 i) 包括物理法、化学法和酶分析法 4. 测定方法： 按取样和检测方式分为取样测定和连续测定： ★ 取样测定 酶反应开始后不同的时间，取出一定量反应液，并用适当的方法停止其反应后，对产物和底物进行定量分析，求得单位时间内酶促反应变化量的方法。 加入酶变性剂 加热使酶变性 * * 第 十 三 章 生 化 药 物 和 基 因 工 程 药 物 分 析 概 念 第一节 概 述 什么是生物药物 利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学合药学的原理与方法制得的药物。 广义的生物药物包括各种天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。 生化药物 Biochemical drugs 生物技术药物 Bio-technology drugs 生物制品 Biological products 生物提取物 生物-化学半合成现代生物技术 什么是生化药物和基因工程药物？ 生物药物 生命基本物质及其衍生物、降解物、结构修饰物等 运用生物技术进行新药研发 如基因工程药物 生物技术 生物材料制备 什么是基因工程药物（Genetic engineering drugs）？ 功能蛋白 预防、治疗某种疾病 调控基因的分离、纯化或人工合成 控制蛋白合成 DNA重组技术 可大量生产的受体细胞 导入 细菌、酵母菌、动植物及其细胞 基因的繁殖表达 发 现 生化药物和基因工程药物的种类 生化药物 基因工程药物 氨基酸、多肽、蛋白质 酶类与辅酶类 多糖类 脂质类 核酸及其降解物、衍生物 主要成分为多肽或蛋白质 激素类及神经递质类 细胞因子类 酶类及凝血因子类 … 生化药物和基因工程药物的特点 来源均为生物体，并都具一定的生物活性和生物功能； 治疗疾病的针对性强、毒副作用小、易为人体吸收； 分子量大，且往往不是定值； 结构确证难； 质量对多种因素敏感，需进行全程质量控制； 需进行生物活性检查、安全性检查、效价检查等； 第二节 质量检验的基本程序与方法 理化鉴别法 生化鉴别法 生物鉴别法 化学鉴别法 UV光谱法 HPLC法 显色、沉淀等 肽图谱 酶法 电泳法 脱盐后等电聚焦法 利用酶的专属性 利用带电荷差异 利用等电点差异 利用生物体进行试验来鉴别药物 1.鉴别 2. 杂质检查 一般杂质检查： 原料药的检查 同化学药物 多糖类：检查低聚糖、核酸、蛋白质等； 特殊杂质检查： 酶类：酶催化反应基本产物分析，相关酶 的检查； （生化药物） 基因工程药物的生产涉及到生物材料和生物学过程，因此可能会存在很多传统生产方法不可能存在的有害杂质。 生产过程中杂质的检查（尤其是基因工程药物） 基因工程药物质量控制必须结合最终产品、有效的中间测试以及有效的方法来去除可能的杂质。 如：原核细胞中表达的产品可能含有内毒素、致敏原 如：动物细胞中表达的产品可能含有DNA杂质或病毒 3. 安全性检查 热原和细菌内毒素检查法 过敏试验——检查异性蛋白： 有可能存在异性蛋白的药物应作过敏试验。 异常毒性试验（异常毒性检查法）： 用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为终点。 降压物质检查法： 降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。 无菌检查法——检查药品及敷料是否染有活菌： 无菌检查指示控制制品染菌状况的一种检测手段。要使药品真正达到无菌，首先应严格执行GMP管理制度。 致突变试验 生殖毒性试验 可能的杂质：残留DNA、宿主细胞蛋白质、内毒素、蛋白质突变体和蛋白裂解物等 基因工程药物中可能的杂质与污染物检查 可能的污染物：微生物、热原和病毒等 4. 含量（效价）测定 含量测定 效价测定 （％） (生物效价或酶活力单位） HPLC法 适用对象： 结构明确的小分子或水解后变成小分子的药物 酶类或蛋白质药物 测定： 以体内或体外法测定参考品的生物学活性 SDS法(蛋白质) 同时测定蛋白质含量，计算特异比活性