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第十四章 基因重组与基因工程 Chapter 14 gene recombination and genetic engineering 基因重组与基因工程 基因重组(gene recombination)是指DNA片段在细胞内、细胞间，甚至在不同物种之间进行交换，交换后的片段仍然具有复制和表达的功能。 基因工程(genetic engineering）是指采用人工方法将不同来源的DNA进行重组，并将重组后的DNA引入宿主细胞中进行增殖或表达的过程。 第一节 自然界的基因转移和重组 一、接合作用 当细胞与细胞相互接触时，DNA分子即从一个细胞向另一个细胞转移，这种遗传物质的转移方式称为接合作用（conjugation）。 一、接合作用 接合作用的典型的例子是细菌所含的一种质粒DNA--F因子，该因子含细菌性鞭毛蛋白编码基因，当F+细菌与F-细菌接触时，性鞭毛连接就会在两细胞间形成，F因子被酶切成单链并通过性鞭毛连接桥向F-细胞转移，从而使F-细菌转变为F+细菌。 二、转化和转染 由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)。 1943年，Avery将有毒型肺炎双球菌DNA与无毒型肺炎双球菌一起培养，结果使无毒型肺炎双球菌转变为有毒型肺炎双球菌。 其原因就是有毒型肺炎双球菌DNA进入无毒型肺炎双球菌中，引起其遗传性状改变。 二、转化和转染 噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。 通过感染方式将外来DNA引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。 转染是转化的一种特殊形式。 三、整合和转导 外来DNA侵入宿主细胞，并与宿主细胞DNA进行重组，成为宿主细胞DNA的一部分，这一过程称为整合。 整合后的外来DNA仍然可随染色体DNA一起复制，并在适当的条件下进行表达，但也可在相当长的一段时间内不表达。 三、整合和转导 整合在宿主细胞染色体DNA中的外来DNA，可以被切离出来，同时也可带走一部分的宿主DNA，这一过程称为转导(transduction)。 来源于宿主DNA的基因称为转导基因。 噬菌体感染宿主细胞后出现的溶菌途径和溶源菌途径就是典型的整合和转导的例子。 四、转座 转座又称为转位（transposition），是指DNA的片段或基因从基因组的一个位置转移到另一个位置的现象。 这些能够在基因组中自由游动的DNA片段包括插入序列和转座子两种类型。 （一）插入序列 插入序列： 典型的插入序列（insertion sequence，IS）是长750-1500bp的DNA片段，由两个分离的反向重复序列和一个转座酶基因。 当转座酶基因表达时，即可引起该序列的转座。 其转座方式主要有保守性转座和复制性转座。 （二）转座子 转座子 (transposons) ：是可从一个染色体位点转移到另一个位点的分散的重复序列，含两个反向重复序列、一个转座酶基因和其他基因（如抗生素抗性基因）。 免疫球蛋白重链基因由一组可变区基因（VH）和一组恒定区基因（CH）构成。 通过这些基因的选择性转座和重组，就可以转录表达出各种各样的免疫球蛋白重链，以对付不同的抗原。 五、基因重组的方式 常见的基因重组方式有： （一）位点特异性重组：在整合酶的催化下，两段DNA序列的特异的位点处发生整合并共价连接，称为位点特异性重组。 （二）同源重组： 发生在同源DNA序列之间的重组称为同源重组(homologous recombination)。这种重组方式要求两段DNA序列类似，并在特定的重组蛋白或酶的作用下完成。 同源重组的机制 * *