T7代“玉米稻”中玉米DNA筛选及序列分析.pdf

摘 要 本研究室于2002年开展水稻分子育种工作，利用离子束介导技术将玉米DNA片段 导入水稻种胚中，获得了一批表现玉米性状特征的突变体，经多代筛选，性状已基本稳 定。挑选4种具有明显玉米性状(气生根、紫色叶鞘等)的水稻株系作为实验材料，编 采用AFLP分子标记技术对这4种变异株系的基因组进行多态性筛选分析，通过生物信 息学方法对筛选得到的“目的条带”序列进行同源性比对以及功能预测、分析。 64对选择性扩增引物筛选结果显示：(1)各个基因组DNA样品(包括玉米和水稻 对照)扩增出的条带总数目在864．980条之间，平均为942条。玉米材料扩增条带最少， 只有864条，水稻材料较玉米材料扩增条带多，均在931条以上。4种水稻变异株系平 (+2)．131-5．2、08．7(+2)．135…21 2．2与水稻对照相比，差异率分别为8．2％、7．5％、 5．3％和6．8％，平均差异率为6．9％；各个引物对在4种材料中扩增出的差异条带数在O．8 米对照相比，相似率分别为36．7％、35．1％、33．6％和34．7％；，均高于水稻对照和玉米 有玉米DNA经离子束介导进入水稻基因组。 回收目的DNA片段、克隆和测序，得到了lO个目的片段的序列信息。通过NCBI 数据库的BLAST进行同源性比对，每条目的片段序列均检索到了一条或多条匹配率较 4条目的片段序列与数据库来源序列100％匹配。在10条目的片段序列中，有6条与水 与玉米mRNA序列高度匹配，为玉米基因组高度同源序列，这两条目的片段有可能是 导入的玉米DNA片段。 ．304的同源DNA序列匹配的蛋白质为玉米的羟酰谷胱甘肽水解酶，该水解酶主要具有 蛋白质为玉米的半胱氨酸二硫键内切酶／泛素蛋白，主要参与蛋白质代谢的催化过程，也 参与RNA的剪接过程，P5M3．131-349目的基因编码合成的蛋白产物可能具有与半胱氨 酸二硫键内切酶相同或相似的功能。从而推测可能有玉米DNA在离子束介导作用下进 入水稻基因组并表达相应的蛋白产物，使变异株系变现出某些玉米性状。但上述蛋白的 功能与变异性状之间的具体联系尚不清楚，有待进一步研究。 关键词：水稻，玉米，离子束介导，DNA，P,FLP ABSTRACT beencarriedonsince2002inour andsomerice ofricemolecularhas laboratory Theresearch breeding wereobtained．4 vari蛐tswith stablemaizecharacters variants，numberedby and08—7(+2)-135-2…122 selectas 08．7．114…1122，08．7．131．1．1，08．7(+2)．131—5—2 respectively,were the the FragmentLength and material．ByutilizingAmplified study betweentherice donetodetectthe differents seriesof were genomic bioinformatics，astudys founfion． aimed and homology variants，and，analysegenes