鸡软骨Ⅱ型胶原蛋白的提纯与鉴定.pdfVIP

盛眶弱懈刚一址T一～ 临床医学 鸡软骨Ⅱ型胶原蛋白的提纯与鉴定 杜红丽1 马新2 (I．郑州人民医院风湿免疫科：2．河南科技大学第一附属医院风湿免疫科郑州450000) 【摘要l目的探讨可溶性II型胶原蛋白(cII)的提纯方法。方法以擎鸡胸软骨为原材料，酸性条件下经霄蛋白酶消化，离心后，应 ,啊DEAE--SephadcxA--50进行鼻子交换层析．透析．盐析．得到纯化的CII。结果 条帝一致。结论 本法提纯c11具有材料丰富，操作简便，重复性好等优点。 【关键词lII型胶原蛋白 提取 纯化 【中图分类号lR3 【文献标识码lA 【文章编号l1674--0742(2011)03(a)一0052一02 胶原蛋白足结缔组织的重要成分之一，分20余种，其中CII主 要存在于软骨基质，占软骨干重的一半以上，研究表明类风湿关 入胃蛋白酶，4℃下消化72h，低温离心，取上清液一20℃保存。 节炎(RA)的发病与CII的自身免疫反应有关，国内外均于口服C 沉淀物再次悬浮干0．5mol／L醋酸中，同样条件下胃蛋白酶重复 Ⅱ诱导免疫耐受治疗RA的相关报道I卜3I，该方法有可能成为安 Tris— 消化，离心2次。将3次上清液混匀，用pH7．6，0．05mol／L 全、简便、有效的新犁治疗方法。因此。CⅡ的提纯是我们研究此方 Hcl，0．2mol／LNaCl溶液充分透析。 法的首要前提，目前国内外文献的报道中多采用盐酸胍来粗提胶 1．5 CII的纯化 原蛋白14。I，盐酸胍是一种蛋白质变性剂且有一定的毒性，如果在 将透析平衡的上清液应用DEAE—SephadexA一50进行离子交 提纯的过程中不能被完全清除，在一定程度上会限制CⅡ的临床 换层剜8I，收集到的C 应用。本试验参照Trenthamt6J及Millert7‘等方法，用胃蛋白酶法提酸进行透析，将透析内液保存。 取，操作简便，重复性好，且提取的CⅡ安全性大。 1．6 CII的鉴定 1 临床资料 采用SDS电泳，将自提的CII与标准CII进行比较。 1．1 一般资料 2结果 2．1 鸡胸软骨：取材于孵化场17d的雏鸡。CⅡ：Sigma公司(来源于 DEAE离子交换层析结果(图1) 鸡)，5mg／瓶。 粗提的蛋白质溶液经DEAE离子交换层析后出现2个峰，第1 1．2 主要仪器 个蛋白峰在加样后用洗脱液A(O．05mol／L 离心机(日立高速冷冻离心机)l层析柜(LKB2023，BROMMA minicoldlab)。 1．3 主要试剂 2．2 SDS电泳结果分析(图2) A 胃蛋白l献Sigma59／瓶)lDEAE—Sephadex50(Amersham),将自提CII与CⅡ标准品采用SDS电泳，条带一致。 Tris(sigma1009／瓶)。 3讨论 1．4 CII的根提 CⅡ是软骨中细胞外基质的重要组成部分，由3条相同的a链 将新鲜于净的鸡胸软骨捣碎成糊状，用缓冲液和蒸馏水分别 组成，呈三螺旋结构，分子量约为283000，由于CII与多种蛋白多 52 FOREIONMEDICALTREATMENT 中外医疗CHINA 万方数据 CHNAFOSEIC4qtoteaCAL 临