人IL22信号肽和大鼠心肌肌凝蛋白α重链片段融合基因的构建及分泌表达.pdfVIP

6·74 · 中国免疫学杂志2002 年第 18 卷 人 IL2 信号肽和大鼠心肌肌凝蛋白 α重链片段 融合基因的构建及分泌表达 ( ) 张 　军 　吕新华 　沈 　茜 　 第二军医大学长海医院实验诊断科 ,上海 200433 　　中国图书分类号 　R3921 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000484X( 2002) α 摘 　要 　目的 :克隆编码大鼠心肌肌凝蛋白 重链 aa736～960 的 cDNA 片段 ,构建携带融合基因的逆转录病毒分泌表达 载体。方法 : 以RTPCR 方法从幼龄大鼠心肌组织中扩增出 681 bp 的目的基因 ,与 hIL2cDNA 序列拼接 ,构建融合基因 hIL2 myosin 及其逆转录病毒载体。采用脂质体法转染 NIH3T3 和 PA317 细胞 ,经 G418 筛选后 ,用 RTPCR 、免疫组化、免疫电镜和 Dotblot 法分析检测融合基因的表达。结果 :核苷酸序列测定显示克隆基因的核苷酸及推导的氨基酸序列与报告序列一致 ,开 放阅读框正确 ;RTPCR 检测提示转染细胞有融合基因 mRNA 转录 ;免疫组化、免疫电镜和 Dotblot 检测表明转染细胞有该肌凝 α 蛋白重链片段的分泌表达。结论 :大鼠心肌肌凝蛋白 重链基因逆转录病毒载体构建成功 ,并可分泌表达 ,为心肌肌凝蛋白转 基因诱导机体特异性免疫耐受及对心肌免疫损伤的研究打下了基础。 关键词 　心肌肌凝蛋白 　克隆 　融合基因 　逆转录病毒载体 Construction and secretive expression of fused gene containing partial rat cardiac myosin αheavy chain cDNA sequence and signal peptide of human IL2 ZHANG Jun ,L XinHua , SHEN Qian . Department of Laboratory Medicine , Changhai Hospital , Second Military Medi cal University , Shanghai 200433 α Abstract 　Objective :To clone the rat cardiac myosin heavy chain cDNA fragment encoding aa736960 and construct its recombinant retrovirus vectorMethods :The 681 bp target gene was amplified from heart tissue of young rats with RTPCR Fusion gene of hIL2myosin was constructed by splicing with preserved region of hIL2 cDNA using ligation methods and subsequently the plasmid pLNChIL2myosin was constructed NIH3T3 cells and PA317 cells were transfected with plasmid pLNChIL2myosin using Lipofectamine After screening with medi um containing G418 , the positive clone was chosen and was detected using RTPCR , immunohistochemistry , immune electron microscope and dotblot Results :The determination of nucleotide sequence sh