鸡破骨细胞分化因子(chODF)编码基因克隆与序列分析.pdfVIP

维普资讯 主垦量亟堕坠 ——2007年10月第l3卷第lo期 ChinJOsteopores，October2007，Vo113，No．10 7O1 · 论 著 · 鸡破骨细胞分化因子 (chODF)编码基因克隆 与序列分析 王艳 姚静 侯加法 摘要 ：目的 克隆鸡破骨细胞分化 因子 (chODF)基 因，并对其进行序列测定和分析 。方法 根据 GeneBank报道的预测的鸡 ODF基 因(GeneBank登录号，XM425625)序列，设计引物 。从鸡胚额骨分离 培养的成骨细胞 中提取总 RNA，逆转录合成 cDNA，用 SOE—PCR的方法扩增鸡 ODF基 因全序列。将获 得的预期大小的PCR产物插入 pMD18一T克隆载体 ，转化 E．coli感受态细胞 ，提取质粒 ，进行双酶切鉴 定，对含有 目的片段 的克隆进行序列测定 。结果 从成骨细胞 中成功地克隆鸡 ODF基 因片段 ，其结 果与 GeneBank上报道 的预测序列具有很高的相似性，达到 99．3％，与人、小 鼠、犬 的一致性分别为 55．4％、52％和 55．7％，提示该基 因在进化过程的保守。ODF基 因全长 1203bp，其阅读框起始于第一 个氨基酸 ，终止于最后一个氨基酸 ，无信号肽 ，共编码 400个氨基酸。结论 ODF作为惟一能够直接 诱导破骨细胞分化和功能的细胞 因子 ，对它的深入研究可为探讨骨质疏松等代谢性骨病 的发病机制 及预 防、治疗开辟出广阔的领域 。 关键词 ：鸡 ；chODF；基 因克隆；序列分析 Clon#ngandsequencingofencodinggenesinchickenosteodastdifferentiationfactor(chODF) WANG Yah，YAOring，HOUJiafa．CollegeofVeterinaryMedicine，NanjingAgrciulturalUniversity，Nanjing210095， China Abstract：0bjective Tocloneandsequencethegeneencodinginchickenosteoclastdifferentiationfactor (ODF)．Methods Theprimersweredesigned accordingtothegenesequenceofchickenODF sequence submittedbyGeneBank(GeneBanksubmissionnumber，XM425625)．TotalRNAwasisolatedfromosteoblastand thecDNAwassynthesizedbyreversetranscription．TheobjectivefragmentwasamplifiedbySOE—PCRandcloned intoPMD18一T vector．E．coliwastransformedwith therecombinantplasmidandpositivecloneswereeslected． Th e insertedDNA wasverifiedbyenzymedigestionandDNA sequencing．Results A 1203bp lengthODF gene wassuccessfullyclonedandhadhighly similarity to the sequencereported in theGeneBank，including theopen readingframe(ORF)from 1to1203，encoding40Oaminoacid．Thesequencereportedherehad99．3％ identity tothedocumented sequence，and italsohad 55．4％ ，52％ and55．7％ identity tohuman，moues and dog respectively，whichsuggestedthattheODFgenehadhighconservationinevolution．Conclusions AsODFgene isthecytokineswhich involved in thedifferentiation andactivation ofosteo