大肠杆菌表达诺如病毒P粒子生物活性及其超微形态.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（３）：１５２０ 大肠杆菌表达诺如病毒Ｐ粒子生物活性 及其超微形态 杨桂华　陈露露　王晓磊　李善爽　赵凌侠 （上海交通大学农业与生物学院植物生物技术研究中心　上海　２００２４０） 摘要　诺如病毒（ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ，ＮＶｓ）是非细菌性急性胃肠炎的主要病原，严重地威胁着婴幼儿、老年 人和公共场所人群的健康。疫苗是目前临床预防由ＮＶｓ引发急性胃肠炎的主要策略之一。按番 茄偏爱密码子设计合成编码诺如病毒（ＶＡ３８７）衣壳蛋白———Ｐ粒子基因ＰＧＥＮＥ（１００２ｂｐ），为便 于纯化，ＰＧＥＮＥ的５＇端包含编码６×ｈｉｓｔａｇ的ＤＮＡ序列；构建原核表达载体ＰＥＴ３２ａＰＧＥＮＥ并导 入ＢＬ２１。在 １６℃条件下，用终浓度 １ｍｍｏｌ／Ｌ的ＩＰＴＧ（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ Ｄ１ｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）诱导 β 表达，ＮｉＮＴＡ树脂亲和层析法纯化获得Ｐ粒子，并通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ加以确认；在透射电子显微镜 （ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＴＥＭ）下观察到了球形Ｐ粒子成功组装；用该蛋白免疫小鼠，成 功获得了活性的抗体血清。为后续用番茄研制口服诺如病毒疫苗奠定了基础。 关键词　诺如病毒　Ｐ粒子　亚单位疫苗 中图分类号　Ｑ７８ 　　杯状病毒科 （ｈｕｍａｎｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ）的诺如病毒 苗。研制新型的疫苗对临床预防因诺如病毒引起的急 （ｎｏｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，ＮＶｓ）是人类非细菌急性胃肠炎病原体之 性胃肠炎爆发具有重要意义。 ［１］ 　　诺如病毒所编码衣壳蛋白（ＮＶｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎ， 一 ，可感染任何年龄段人群，婴幼儿和老年人属于易 感人群，发展中国家每年有约２０万５岁以下儿童因感 ＮＶＣＰ）形成的类病毒粒子（ｖｉｒｕｓｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＶＬＰｓ）在 ［２３］ ［３］ 染该病素毒而死亡 。ＮＶｓ最早是 １９６８年从美国俄 形态和抗原方面与天然的病毒相似 。最近研究发 亥俄州一所小学突发胃肠疾病的粪便中发现的，主要 现，醣基化人组织血型抗原（ｈｕｍａｎｈｉｓｔｏｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐ ［２］ ［９］ 通过污染的食物、水源或人人接触传染。ＮＶｓ是无包 ａｎｔｉｇｅｎｓ，ＨＢＧＡｓ）是ＶＬＰｓ的受体 。Ｈｕｔｓｏｎ等 通过 对８种ＮＶｓ毒株（Ｃ５９、ＶＡ１１５、 型的ＶＡ２０７、 型的 膜病毒，其基因组是７．７ｋｂ正义单链ＲＮＡ，并编码一个 Ⅱ Ⅰ ［４５］ ＮＶ、ＶＡ３８７、ＭｘＶ、ＭＯＨ和ＧｒＶ）研究，首次报道了人类 ５８ｋＤａ的ＮＶｓ衣壳蛋白 ；该病毒进化快，毒株易发 ［２，６］ 与诺如病毒感染之间相关性，并发现ＭＯＨ不能识别 Ｏ 生变异 ；Ｇ ．４是目前流行的诺如病毒之一，对 Ⅱ 型血的ＨＢＧＡｓ，ＮＶ不识别 Ｂ血型的ＨＢＧＡ，而ＶＡ３８７ ＮＶｓ基因编码序列分析发现，与２０年前所分离的毒株 ［２，７］ 可以识别腺体和 ＡＢＯ三种血型的 ＨＢＧＡｓ。基于 相比，病毒进化是不规则的 。每次新毒株的出现都