反义寡核苷酸阻断乳腺癌细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶的表达和意义.pdfVIP

第30卷第6期 同济 大 学 学 报 (医 学 版 ) V0l_30No．6 2009年 l2月 JOURNALOFTONGBUNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE) Dec．，2009 · 基础研 究 · 反义寡核苷酸阻断乳腺癌细胞中葡萄糖神经 酰胺合成酶的表达和意义 殷冬梅 ，吴娟娟 ，井 园 ，王 新 ，葛锦涛 (1．南通大学医学院生物化学教研室，江苏 南通 226001；2．南通大学医学院生命化学实验室，江苏 南通 226001) 【摘要】目的 探讨靶向葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramidesynthase，GCS)的基因试剂MBO．asGCS逆转乳 腺癌多药耐药的作用机制及其意义。方法 MBO-asGCS处理体外培养的人乳腺癌细胞 MCF-7及其耐药型MCF． 7／AdrR，采用细胞毒性分析测定MBO—asGCS对MCF-7一AdrR存活率的影响，RT—PCR和Western印迹分析对耐药 型细胞GCS的表达变化，检测对 caspase3／7的活性影响及流式细胞仪测定MBO．asGCS对耐药型细胞的凋亡情 况。结果 MBO-asGCS转染人耐药型乳腺癌细胞MCF-7／AdrR后，与未转染组细胞的Ic 分别是 0．18I~mol／L和 12．50i．tmoVL，药物敏感性提高了69倍；MB0一asGCS抑制GCS的mRNA表达70％，减少GCS蛋 白表达39％(P 0．01)；转染MBO—asGCS后耐药型细胞 的caspase3／7活性上升 53％(P0．05)，细胞凋亡率上升 5．6倍 (P 0．01)。结论 GCS过表达是耐药型乳腺癌细胞的特征，靶向人 GCS的反义寡核苷酸可直接抑制GCS的过表达， 诱导耐药细胞凋亡，有效逆转其耐药性，GCS可能是治疗耐药型乳腺癌的一个潜在靶点。 【关键词】乳腺肿瘤细胞；反义寡核苷酸；葡萄糖神经酰胺合成酶；药物耐药 【中图分类号】R737．9 【文献标志码】A 【文章编号】1008—0392(2009)06—0O4O一06 Antisenseoligonucleotidesblockglucosylceramidesynthaseexpression inbreastcancercellsand itssignificance YINDong—mei一， Juan-juan，JINGYuan，WANGXin，GEJing—tao (1．Dept．ofBiochemistry，Me．eftCollege，NantongUniversity，Nantong226001，JiangsuProvince，China； 2．LifeChemistryLab，MedicalCollege，NantongUniversiyt，Nantong226001，JiangsuProvince，China) 【Abstract】Objective Toinvestigate the effectofantisenseoligonucleotidestargetinghuman glucosylceramide synhtase and study its significance on reversing multidrug—resistance in breast adenocarcenomacells．Methods MB0．asGCS(natisenseGCS，mixed—backboneoligonuc1eotides)were transfectedtohumanbreastcacercellMCF-7 nad itsdrug-resistantcellMCF-7／AdrR．Cellviabilityassay wasperformedtoassesstl1ecytotoxic influenceon MBO—asGCS．whileR