HLA-A＊02／24限制的HBcAg表位特异性细胞毒T细胞克隆的建立及分析.pdfVIP

· 论 善 · JMedRes，Dec2009，Vo1．38No．12 HLA—A冰02／24限制的HBcAg表位特异性 细胞毒 T细胞克隆的建立及分析 唐祖 明 郑纪山 张胜子 杨玉志 张益红 摘 要 目的 建立 HLA—A 0201／2403限制 的 HBcAg表位特异性 CTL细胞克 隆。方法 HLA—A}0201／2403阳性 HBV感染者的外周血单个核细胞 (PBMC)分别用限制性表位肽 HBcl8～27和 HBcl17～125刺激 ，并 以有限稀释法进行克隆化 ， 期间单独使用植物血凝素 (PHA)及联合使用表位肽刺激。用免疫荧光、流式细胞术以及乳酸脱氢酶释放实验对所获克隆进行鉴 定。结果 从 HBcl8～27活化的细胞中获得29株细胞克隆，其 中28株为 CD8 T克隆，均具有特异性细胞毒活性。从 HBcl17 — 125激活的细胞中获得 12株 CD8 T克隆，其 中9株有明显的细胞毒活性，另 3株细胞毒活性则显著低下。克隆化过程 中单独 使用 PHA及联合使用表位肽 ，克隆形成率分别为 15．62％和14．58％。结论 分别用表位肽 HBcl8—27和 HBcl17—125，能激活 HLA—A 0201／2403阳性 HBV感染者的CD8 T细胞 。建立 CD8 T克隆过程 中，表位肽 的使用不能提高克隆形成率 。 关键词 HBV感染 细胞毒 T细胞 细胞克隆 表位 GenerationandAnalysisofHLA ·-A女02／24RestrictedHBcAg--specificCytotoxieT LymphocyteClonesinaPatientwithChronicHepatitis B． Zuming，ZhengJishan，ZhangShengzi，eta1．StateKeyLaboratoryofBioelectronics，SoutheastUniversity，Nanjig210096，China Abstract 0bjective TogenerateHLA —A 0201andA 2403restrictedHBcAg—specificcytotoxicT lymphocyte (CTL) clones．Methods Peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)werederivedfromaHLA—A}0201／2403一positivepatientwithchron- ichepatitisB．PBMCswerestimulatedrespectivelyusingtwosyntheticpeptides(HBcl8～27andHBc117～125)，andepitope—specific CTL clonesweregeneratedby limitingdilution techniquewithPHA aloneorcombinedwith syntheticpeptides．Thecellcloneswerethen characterizedbyIF staining，FCM andLDH release．Results After2weeksofinvitrostimulatingPBMCs，specificCTL lineswereestab— lished．29T clonesweregeneratedfrom thoseCTLlinesusingHBcl8～27 stimulating．Amongthe29clones，28clonesbelongedtoCD8 T cellsandalldisplayedcytolyticactivity．12CD8 T clonesweregeneratedfrom thoseCTL linesusingHBcl17～125stimulating．Spe- cificcytotoxieactivitywasobservedin9 ofthoseclones．Theotherthreedisplayed lesscytolyticactivity．Intheprocessofcloning，PHA wasusedaloneorcombinedwithsyntheticpeptides，andtheachievementshowedarateof15．62％ an