新型海洋微生物_葡萄糖苷酶基因的克隆_表达及重组酶性质.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, December 25; 25(12): 1914-1920 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved 研究报告 新型海洋微生物β-葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及重组 酶性质 1 1 1 1 1 1 2 1 房伟 , 方泽民 , 刘娟娟 , 洪宇植 , 彭惠 , 张学成 , 孙宝林 , 肖亚中 1 安徽大学生命科学学院 生物工程研究中心, 合肥 230039 2 中国科技大学生命科学学院, 合肥 230026 摘 要: 通过功能筛选方法, 从中国南海海洋表层海水微生物元基因组文库筛选得到了6 个β- 葡萄糖苷酶阳性克隆。对 其中的一个阳性克隆pSB47B2 进一步亚克隆和序列分析, 获得一新型β- 葡萄糖苷酶基因(命名为bgl1B)开放阅读框。以 pET22b(+) 为载体、Escherichia coli BL21(DE3)为宿主菌, bgl1B 被高效活性重组表达。通过Ni-NTA 亲和层析柱纯化了 重组Bgl1B (rBgl1B) 。纯化的rBgl1B 催化pNPG 水解反应的最适pH 为6.5, 最适温度为40oC 。在最适反应条件下, rBgl1B 水解pNPG 的活性达到39.7 U/mg, K 和 V 分别为0.288 mmol/L 、36.9 µmol/min 。纤维二糖是rBgl1B 的有效作用底 m max 物, 其K 和 V 分别为0.173 mmol/L 、35 µmol/min 。但rBgl1B 不能催化转化蔗糖、乳糖、麦芽糖以及CMC 。rBgl1B m max 催化pNPG 的水解反应对高浓度的Na+有较好的耐受性, 而低浓度的Ca2+ 、Mn2+对该酶活有一定促进作用。不同于许多 来源于真菌的酸性β- 葡萄糖苷酶, rBgl1B 在pH 7.0~9.0 范围内具有比较高的酶活力并具有较好的稳定性。 关键词: 海洋微生物, 元基因组, β- 葡萄糖苷酶, 葡萄糖苷水解酶 Ⅰ Cloning and characterization of a β-glucosidase from marine metagenome 1 1 1 1 1 1 2 Wei Fang , Zemin Fang , Juanjuan Liu , Yuzhi Hong , Hui Peng , Xuecheng Zhang , Baolin Sun , and Yazhong Xiao1 1 Biotechnology Center, School of Life Science, Anhui University , Hefei 230039, China 2 School of Life Science, University of Science and Technology of China, Hefei 230026, China Abstract