课件微生物的利用2.pptVIP

第一部分 微生物的利用 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 ? 1、尿素细菌的特点？在生态系统中的作用？ 2、配置什么培养基，才能从土壤中分离出尿素细菌？ 3、怎样鉴定筛选出来的是尿素细菌？ 4、如何统计1g土样中尿素细菌的数目？ 尿素是一种农业氮肥，但有时给同种作物使用等量的尿素，效果差异很大。经研究发现尿素只有通过尿素细菌的分解作用，才能被作物吸收。 尿素细菌，被作物吸收。 施用尿素效果的好差，与土壤中尿素细菌的含量有很大的关系。 牛肉膏蛋白胨培养基能否用来筛选尿素细菌? 25ml尿素培养基配方 2、操作步骤： 液体培养基上扩大培养→ 将菌液稀释10-5-10-7倍→ 涂布到固体培养基→ 形成单个菌落→ 统计菌落数目（30-300）→ 计算样品中细菌数目 1、划线分离： 液体培养基上扩大培养→固体培养基（培养皿）上划线分离→固体培养基（试管斜面）上再次划线分离 优点：方法简单 2、涂布分离： 液体培养基上扩大培养→将菌液稀释10-5--10-7倍→固体培养基上涂布 优点：单菌落更易分开 3、利用选择培养基进行分离 （一）制备固体培养基 （二）制备细菌悬液 （三）用涂布法分离细菌 （四）培养，观察记录 （一）制备固体培养基 （一）制备固体培养基 * 一、尿素细菌 1、含脲酶，使尿素分解成氨，即尿素可以是氮源 2、在生态系统中属于分解者 含量 培养基组分 定容至1000ml 5g 10g 5g 水 NaCl 蛋白胨 牛肉膏 0.025g 葡萄糖 0.12g NaCl 0.12g K2HPO4 含量 培养基组分 定容至25ml 0.25mg 0.5g 2g 蒸馏水 酚红 琼脂糖 尿素 固体培养基选择培养基 各组分的作用? 二、尿素细菌的筛选与鉴定 三、统计1g土样中尿素细菌的数目 （一）稀释涂布培养法 1、稀释涂布培养法与平板划线法都是分离菌种最常用的方法，稀释涂布培养法还常用于统计样品中活菌的数目。 细菌的分离 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 （二）显微镜计数法 　　即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的（稀释）样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数，并计算样品中的含菌数。 四、实验操作步骤 1、配制培养基（步骤） LB固体培养基（目的） 尿素固体培养基 2、灭菌（方法） 3、倒平板（需要倒3个LB平板，9个尿素平板） 10-4 10-3 10-2 尿素 LB(对照) 每个稀释度 1个LB对照平板 3个尿素平板(平行重复组) （二）制备细菌悬液（5mL） （三）用涂布法分离细菌 （三）用涂布法分离细菌 *