丙型肝炎复合免疫治疗的研究.pdfVIP

丙型肝炎复合免疫治疗的研究 张贺秋，冯晓燕，修冰水，宋晓国，王国华，陈茎 杨锡琴，朱翠霞，何竞，凌世淦 军事医学科学院基础医学研究所，北京，100850；张贺秋010 摘要研制新型丙型肝炎免疫治疗疫苗，采用复合体液免疫原、复合T细胞表位免疫原和高聚化 CpG质粒佐剂，进行复合免疫治疗剂的配伍。初步进行了急性毒性试验，中和抗体交叉活性试验及体 外刺激丙型肝炎病人外周血淋巴细胞细胞因子检测，为进一步研发丙型肝炎新型免疫治疗方法奠定基 础，同时也将为其他重大传染病新型免疫治疗方法研究提供思路。 s C 有代表性的序列，合成基因，克隆表达，分析其和我 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HePatiti virus。HCV)引起的传染性疾病，早期症状不明显，国HCV感染病人血的交叉反应性，根据实验结果选出 常不被人们所重视。HCV在我国感染率比较高，约占 其中高交叉反应性HVRl加以组合，基因连接和克隆表 人群的3．2％，全国预计受感染者在3800万以上。全球约达，获得了含有多个高交叉反应性HVRl的融合免疫 原。 有感染者1．7．2．0亿。目前以聚乙二醇IFN．联合利巴韦 林疗法的总应答率不到50％。感染者中绝大部分(约 1．2．多型别HCV，El中和表位免疫原：从HCV 数据库中下载了HCV／El 70％)可发展成慢性感染，自然病程可长达20—30年或 N端序列(1490条)进行了比 更长，最终部分可发展成肝硬化和肝细胞癌，以及诱 较分析，发现相关序列具有型特异性，同一型别序列 发多种自身免疫性疾病等，危害极大。因此，亟需发 同源性较高。所以对不同型别的序列分别进行分析并 展一种新型有效的预防或治疗的方法。 选出各型别的代表性序列。根据HCV不同型别的感染 对HCV自愈病人及动物(黑猩猩)感染实验证率高低，选择了最主要型别：HCVla，lb，2a，3a，4a， 明，凡能清除病毒的个体具有强烈的，广泛的多克隆 6a等6个型的代表性序列，加以组合，合成基因，克隆 表达多型号别HCVEl中和表位免疫原。为了提高抗 的T细胞(包括CD4+和CD8+)免疫应答。但最新研 究表明，HCV编码的核心蛋白(C)、第2包膜蛋白原的免疫原性，在多型别免疫原中还融合了一段通用 HLA-DR表位序列。 (E2)、非结构NS3蛋白酶，以及NSSA蛋白等，均可 以通过不同的机制，抑制机体固有免疫，使机体对HCV 1．3．HCV多表位T细胞复合免疫原：在当前文 的感染处于免疫耐受状态。因此，慢性感染病人机体 献已有大量报道的基础上，我们进行了广泛的文献检 特异性免疫反应(T细胞和体液免疫反应)均显不足， 索，对目前已报道过的T细胞表位进行了比较分析，精 这是除了HCV高度变异可逃逸机体的免疫监察外，致 选其中与病毒清除关系密切的，表位所存在的基因区 使目前HCV感染慢性化和疫苗研究未果的又一主要原 段变异相对较小的表位和表位区段。最终选择了如图 因。如何设计出既没有免疫抑制作用，又能充分激发 核心区，NS3，NS5相应表位密集的区段和表位。 机体有效免疫应答的免疫原，是HCV免疫治疗研究的 1．4构建含有多个不匾]CpG序列的重组质粒： 关键。本研究拟采用免疫增强剂和多表位免疫原的策 ODN片 本室以pUCl9为载体反复10次插入由11个CpG 略，以解决这一难题。 断首尾相连而成的Multi．CpG基序，具有很强的免疫激