肠产毒性大肠杆菌检测基因芯片研制.pdf

摘要 摘要 Eschericbia 肠产毒性大肠杆菌(Enterotoxigenicco／i,ETEC)是引起发展中国 家婴幼儿腹泻以及热带或亚热带地区旅游者腹泻的主要病原菌。它通过释放肠 毒素，引起人体肠液分泌紊乱，有时导致代谢性酸中毒、高血钾症和心力衰竭 等并发症，严重危害人们的健康。因此，建立一种快速、准确的ETEC检测技 术是当前肠道感染疾病的诊断、治疗和监控等工作迫在眉捷的需要。 l、015、025、027、078、 肠产毒性大肠杆菌的常见的血清群有06、08、01 STh、STb等四种肠毒素的至 0173等19种；事实上，细菌需表达LT、STp、 少一种才可被鉴定为是ETEC。本文通过对以上19个不同O血清群大肠杆菌各 自所特异的寡糖单位处理酶基因臌及唧(或脚、wzm基因)、以及对ETEC 所特有四种肠毒素编码基因e／t、est／l Cb)、estA仞，)、estB基因分别设计寡核苷 酸探针，利用基因芯片检测技术对ETEC菌株进行。血清群分群和毒素鉴定。 rRNd 经过反复筛选验证得到的特异探针有48条，荧光定位探针l条，以细菌16S 基因为靶序列设计的的正对照探针l条，以及由多聚T构成的负对照探针l条． 共计5l条。而在靶基因的扩增环节，本文采用的是全基因组随机引物PCR法， 先后只用两条引物便可完成对细菌DNA进行全基因组范围的扩增，有效克服了 PCR中不可避免的引物相互干扰问题，成功实现了对多个靶标DNA 在Multiplex 的同步有效的扩增。 本研究基于全基因组范围随机引物PCR法和寡核苷酸芯片检测技术，建立 了一种快速、准确、特异、灵敏的肠产毒性大肠杆菌检测方法，为今后的医学 诊断、水和食品卫生监测、出入境检验检疫等工作提供了新的技术参考。 关键词：肠产毒性大肠杆菌；随机引物PCR扩增；基因芯片；O血清群； 肠毒素 Abstract Abstract Escherichia themostconlmon Enterotoxigeniccall(ETEC)areamong tlleinfantilediarrheainthe countriesand for developing enteropathogensresponsible areasofthe inthe or world．Thus，all trayelers’diarrhea tropicalsubtropical todetectETECbecamean taskfor ofa andaccurate urgent establishment way rapid infections． surveillanceworkofintestinal the and diagnosis，treatment