pEGFP-N-%2c2--VEGF基因转染骨髓间充质干细胞与PLGA材料相容性.pdfVIP

摘要 摘要 目的：探讨转染pEGFP—N2．VEGF(携带增强型绿色荧光蛋白的血管内皮生长因 子基因)后的骨髓间充质干细胞与PLGA(聚乳酸／乙醇酸共聚物)材料的相容 性。 方法：1、原代培养以密度梯度离心法获得兔骨髓间充质干细胞，常规换液、传 代、冻存与复苏，流式细胞仪检测其细胞周期；2、将含pEGFP．N2．VEGF基因 质粒的大肠杆菌菌种摇菌过夜，以无内毒素大提试剂盒提取质粒，用紫外分光 光度法及琼脂糖电泳检测其浓度及纯度；3、用脂质体包埋法将pEGFP．N2．VEGF 基因转入骨髓间充质干细胞，PCR检测转染效果，免疫组织化学观察是否有蛋 白表达；4、同法转染接种于PLGA种植模型上的骨髓间充质干细胞，分别利用 荧光显微镜及扫描电镜进行观察；5、MTT(四唑盐比色实验)检测转染 pEGFP．N2一VEGF前后细胞活力，分4组：①骨髓间充质干细胞组、②转染 pEGFP．N2．VEGF骨髓间充质干细胞+PLGA组。 结果：l、原代骨髓间充质干细胞呈细长梭形，克隆样生长；多次传代后出现老 化现象，细胞变扁平。流式细胞术示第二代的骨髓间充质干细胞90％以上的细胞 都处于Go／Gl期。而第六代骨髓间充质干细胞Go／G1期约占80％左右。2、紫外分 测可有特征性的扩增条带出现，与DNAmark](1|比较，条带位置相符：48h后行细 胞免疫化学染色，VEGF抗体反应呈阳性。4、转基因后可以在荧光显微镜、扫 描电镜下较好的观察细胞与材料之问的相互作用；5、MTT示转染日矿后4组各孔 光吸收值在492nm波长时分别为：0．309+0．113、0．350-j：0．176、0．295+0．112、 O。102+0．053，①组与②组、③组与④组在统计学上都无统计学意义(po．05)。 结论：1、密度梯度离心法可获得足够数量较强分化潜能的骨髓问充质于细胞； 达；3、转染pEGFP—N2．VEGF基闪町作为标记骨髓问充质干细胞的一’种囱．效方式， 为动态脱察细胞与材料之fHJ的，f}1而：作片j打下了一定的基础；4、转染 摘要 织工程研究提供了一种新的手段。 关键词：骨髓问充质干细胞；基因转染；生物相容性；血管组织工程 Abstract ABSTRACT of objeetive：TransfectionPlasmidinto stemcells pEGFP—N2一VEGF mesenchymal and onits thenresearch with PLGA． cytocompatibility culture to Methods：I，primarybydensitygradient obtainbone centrifugation marrow stem mesenchymMcells，conventional and changeliquid，cryopreservation checkit’Scell recovery，flowcytometry cycle；2，containingpEGFP—N2一VEGF gene of strainsE．colibacteria plasmid Grand