betA%2fBADH双价基因植物表达载体构建及四倍体刺槐遗传转化.pdf

摘 要 土地盐渍化影响到农业的发展，提高植物耐盐性已成为开发利用盐碱地的主要手 生态树种和饲料树种，通过遗传转化提高四倍体刺槐的耐盐性，对于扩大其栽培面积、 改善生态环境和发展畜牧业将具有重要的作用。 甜菜碱是重要的有机渗透调节物质之一，能够增加胞质渗透压，平衡液泡水势， 还对膜系统和蛋白质等生物大分子有一定的保护作用。胆碱脱氢酶基因(betA)和甜 菜碱醛脱氢酶基因(BADH)为甜菜碱合成途径中的两个关键酶基因，分别调控甜菜 碱合成的两步反应，将它们导入植物将有助于耐盐性的提高。因此，我们开展了耐盐 基因betA和BADH的亚克隆、植物表达载体构建和以四倍体刺槐为受体的农杆菌介导 遗传转化研究，取得如下结果： I更换为Sma pCPA．betA上的betA编码序列上游Sac 35S—OCS植物表达载体及构建双价基因植物表达载体。 35S启动子一betA基因一终止子”表达单 单价基因载体pCAMBIA2300一betA含有“CaMV 元及一个CaMV35S启动子驱动的Ⅳ尸丁II筛选基因；双价植物表达载体 35S启动子一betA基因．终止子．CaMV35S pCAMBIA2300．betA—BADH含有“CaMV 启动子．BADH基因．终止子”表达单元及CaMV35S启动子驱动的胛7’II筛选基因。通 过酶切鉴定及测序，证明构建的植物表达载体符合设计目标。 3、对农杆菌介导的刺槐遗传转化体系进行了优化。结果表明，以四倍体刺槐组 溶液处理伤口可提高再生抗性芽获得率，低温预培养处理后可在短期内(30d)使再 生抗性芽获得率和生长状态均有所提高。 双价基因的四倍体刺槐转基因株系。 关键词：胆碱脱氢酶基因；甜菜碱醛脱氢酶基因；植物表达载体；四倍体刺槐； 农杆菌；遗传转化 Summary The one salinizationofsoilis ofthemost factorstolimitthe important influencing thesalttoleranceofthe agriculturaldevelopment．Improving plantsbygeneticengineering isafocusresearchfieldinrecent blacklocust(Robinia a years．Tetraploid pseudoacacia)is new introducedfromKorea．It leavesand species growsrapidly,hasplump strong andcouldbeusedin andfeed．To thesalt resistibility improvingecosystem improve toleranceofthe blacklocust transformationis for tetraploid throughgenetic veryimportant itscultivated and animal expanding area,improvingecosystemdevelopinghusbandry． betaineisoneofthe matters