东北虎源等孢球虫虫种鉴定及其生物学特性与药物防治研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 珍稀观赏动物的球虫疾病报道近年来逐渐增多。笔者对黑龙江省某动物园的 92 只猫科 动物进行了球虫感染调查并进行了六种粪检法检测效力的测定，结果 teleman 法+饱和盐-糖 溶液漂浮法为最佳的检测方法，其球虫卵囊检出率为 17.39% （16/92），其中幼龄动物感染 明显多于成年动物。 对球虫卵囊培养后进行形态学观察：未孢子化卵囊多数呈卵圆形，平均长为 45.875µm， 平均宽为 34.775µm，形状指数为 1.19。卵壁光滑没有颜色。卵膜共分两层，外层薄而无色， 内层厚呈黑色。无卵膜孔，无极粒，无残体。卵囊孢子化后，胚囊分裂成为两个孢子囊，每 个孢子囊中含有四个子孢子，残体清晰可见。孢子囊呈椭圆形，平均长为 26.875µm，平均 宽为 22.375µm，形状指数为 1.25。提取虫体基因组DNA ，并根据 GenBank 上发表的猫等孢 球虫核糖体内转录间隔区Ⅰ（Cystoisospora felis internal transcribed spacer 1, ITS1 ）序列设计 引物，对目的片段进行 PCR 扩增和序列测定。应用 DNAStar 软件，将长为 389bp 的目的片 段与 Genbank 中发表的 19 种球虫相应的 ITS1 序列进行同源性比较，序列分析显示东北虎 源球虫与其它 19 种球虫相应序列同源性为 38.11%～98.71%之间，其中与等孢球虫的同源性 为 55.64%～98.71%之间。综合对东北虎源球虫形态学观察、PCR 扩增其 ITS1 序列并进行序 列分析，构建分子进化树及系统发生关系的分析以及动物感染实验，确定东北虎源球虫为等 孢属球虫，并且与猫等孢球虫亲缘最近。 3 4 应用单卵囊分离技术，获得东北虎源等孢球虫纯种卵囊。分别给猫感染 30、10 、10 个孢子化卵囊，观察猫的排卵囊规律，包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵 囊数（OPG 值）。通过对比，验证了潜隐期、显露期、OPG 值与感染剂量存在相关关系，即 感染剂量越小，潜隐期越长，显露期越长，OPG 值越小；反之亦然。感染 30 个卵囊的猫无 3 4 明显临床病征；感染 10 个卵囊的猫腹泻出现少量血便；感染 10 个卵囊的猫水样腹泻后出 现大量血便。 3 4 3 感染 10 与 10 个孢子化卵囊的猫完成卵囊排放，于 10d 后再次感染 10 个孢子化卵囊， 观察猫的排卵囊规律，包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及 OPG 值。结果表明感染强度 与免疫力存在正相关关系，即首次感染强度较大组产生的免疫记忆较强，再次感染相同剂量 卵囊后，其卵囊排出数量少，表现出的病症也相对较轻。 妥曲株利和莫能菌素分别按 0.4ml·kg-1 -1 4 bw 和 15mg·kg bw 喂猫并于当日接种 10 个孢子 化卵囊，首次用药后 24h 再给药一次。于感染后三天（PID3 ）开始，用饱和糖-盐水溶液漂 浮法检查粪便，观察猫的排卵囊规律，包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及 OPG 值。结 果表明两预防组均无卵囊检出，妥曲株利与莫能菌素给药后均可有效地预防等孢球虫感染。 4 -1 给猫感染 10 个孢子化卵囊，于卵囊始现日将妥曲株利和莫能菌素分别按 0.4ml·kg bw -1 和 15mg·kg bw 喂猫，首次用药后 24h 再给药一次。结果给药后，两治疗组的卵囊排出强度 快速下降。与莫能菌素相比，百球清表现出更强、更快的杀虫和抑虫作用，其治疗效果更为 优秀。 利用妥曲株利和莫能菌