2，4-滴丁酯抗性细菌球形赖氨酸芽孢杆菌（Lysinibacillus sphaericus）的分离鉴定及生长特性研究.pdfVIP

作物杂志 Crops 2013．2 2，4Ii商丁酯抗性细菌球形赖氨酸芽孢杆菌 (Lysinibacillussphaericus)的分离鉴定及生长特性研究 滕春红 刘永双 陶 波 李相全 于海涛 邱丽娟 (东北农业大学农学院，150030，黑龙江哈尔滨；中国农业科学院作物科学研究所，100081，北京) 摘 要 从生产2，4．滴丁酯的农药厂排污 口 其突出特性是选择性强、杀草谱广、用量低、使用安 采集污泥样品，驯化分离得到 l株能够以2，4．滴丁 全_4J。转基因抗 2，4一滴丁酯作物的创制将打破 酯为唯一碳源和能源生长的细菌 12， 最高耐受 2，4-滴丁酯不能用于双子叶作物生长期的局限。 2，4一滴丁酯浓度为 200mmol／L。根据其形态特征、 本研究从生产 2，4-滴丁酯的农药厂排污 口污 生理生化特性、16SrRNAm序列分析，初步鉴定 泥样品中筛选到一株极端耐受 2，4一滴丁酯的菌株 为球形赖氨酸芽孢杆菌 (Lysinibacillussphaericus)。 ， 通过生理生化指标的测定和 16SrRNA的分析 采用正交试验优化得到T2最适生长条件为：接种量 对其进行了鉴定，并优化了其最适生长条件。这为 5％，培养基初始pH值为7，培养基装液量为50mL／ 进一步克隆抗2，4．滴丁酯基因和培育具有 自主知 250mL，培养温度 30℃。 识产权的抗2，4-滴丁酯作物提供了理论基础。转 关键词 2，4。商丁酯；抗性；球形赖氨酸芽孢杆 基因抗2，4一滴丁酯作物的创制将打破 2，4．滴丁酯 菌；鉴定；生长特性 不能用于双子叶作物生长期的局限，使非常优秀的 2，4一滴丁酯用于双子叶作物苗后茎叶处理，解决多 近 10余年来，抗除草剂作物几乎成为一种潮流 年生及恶性杂草问题。抗 2，4一滴丁酯作物的培育 迅速发展，特别是转基因抗草甘膦作物的广泛种植， 将为我国转基因作物的开发和应用起到巨大的推动 给农业生产带来了新的变化，少耕与免耕及作物窄 作用。 行种植的推行有了可靠保证，杂草防治体系变得更 1 材料与方法 为简单而有效，不仅给农民带来了很大经济效益，而 且对农药工业、特别是除草剂工业、品种筛选与创制 1．1 主要仪器、试剂和培养基 及除草剂品种销售造成深刻的影响 J。 全 自动 PCR仪 Tetrad2(BIO—RAD)，电泳仪 大量抗除草剂转基因作物品种的推广和种植， DYY-2C(北京市六一仪器厂)，NanoDropND-1000 给世界农业带来了前所未有的改变，但是随之也出 紫外分光光度计 (北京托摩根生物科技有限公司)， 现了一些问题，大量抗草甘膦杂草的产生，使人们意 超净工作台BCN一1360(北京东联哈尔仪器制造有限 识到抗草甘膦作物不能完全替代其他类型抗除草剂 公司)，HZQ．F160恒温振荡摇床 (哈尔滨市东联电 作物品种。人们为了应对抗性杂草 ，期望培育出抗 子技术开发有 限公 司)，电子 显微镜 (Olympus 不同类型除草剂的转基因作物 J。作为抗草甘膦 CK40)。 作物的补充 ，抗2，4．滴丁酯作物显示了其优越性。 95％2，4一滴丁酯原油 (大连松辽农药股份有限 2，4．滴丁酯系苯氧羧酸类除草剂，是世界上第一个 公司)。 具有选择性的除草剂。2，4一滴丁酯在高浓度条件下 富集培养基为 LB液体培养基，添加一定量的 抑制双子叶植物的生