土壤中苏云金杆菌HBF-1菌株毒蛋白ELISA检测方法建立及应用.pdf

摘要 immunosorbeut 分析(Enzyme-linkedassay，ELISA)测定方法。 抗原是影响抗体特异性和效价的重要因素。为了得到高纯度的杀虫晶体蛋白，本 研究采用等电点法沉淀出品体杀虫蛋白，用聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步纯化粗提的杀 用该抗原分四次对新西兰白兔进行免疫，获得了高特异性的抗血清，再用辛酸一硫酸 酶标记IgG，制备出标记率为0．28，克分子比为0．798的酶标抗体。 法均优于其它两种方法，问接ELISA法次之，从而证明双抗夹心法是一种检测土壤 最适工作浓度为1：800稀释；待测样品的反应时间为37C 为37C 叉性试验和重复性试验验证，证明双抗体夹心ELISA法是一种特异、敏感、快速、 操作简便的方法。 开花前期施入Bt毒蛋白，四处理的蛋白含量3d达到最高，随后原液和2倍稀释液土 施入Bt毒蛋白，四处理蛋白含量3～7d达到最高，随后呈平缓下降的趋势。因此， 开花前期和开花后期进行灌根施药，土壤中Bt蛋白表达高峰期即为铜绿丽金龟 (Anomala corpulenta 子幼虫达到最佳防治效果。 关键词：苏云金芽胞杆菌：杀虫蛋白；抗体；酶联免疫吸附分析：土壤 Estabfishmentand ofELISAtotheDetectionoftheProtoxlnof Application Bacillus StrainHBF-1inSoil thuringlensis Mastercandidate：WuRui．hua Supervisor： ProfessorLiGuo—xun Professor FengShu-liang hasectandPestControl Major： Agriculture Abstract The ofthisresearchwasto onthe of ofthe purpose study preparationantigen insecticidal of HBF-1．the crystalproteinBt(Bacillusthuringiensis)strain andall immunosorbent and antibody enzyme—linked assay(ELISA)Wasdeveloped todeterminetheBt insoil．The HBF一1strainfromBtwhich performed protein specific showed toAnomala andA．exoleta． hi【曲toxicity corpulenta Inthis wasobtainedisoelectric the study,thecrystalprotein by point extractedwas SDS·PAGE．The with proteinpurifiedby highlypurifiedprotei