水稻瘤矮病毒P3、P7、P8、Pn9、Pn10、Pn11、Pn12的酵母双杂交载体的构建及自激活效应检测.pdfVIP

第 30卷 第 9期 热 带 作 物 学 报 Vol-30 No．9 2009年 9月 CHINESE JOURNAL OFTROPICAL CROPS Sep．2009 水稻瘤矮病毒 P3、P7、P8、Pn9、PnlO、Pnl1、 Pnl2的酵母双杂交载体的构建及 自激活效应检测 吴建国，蔡丽君，胡梅群，谢荔岩，林奇英，吴祖建 ，谢联辉 福建羹鸯省植蓉物窃病嘉蒌毒擎学量重耋点篓实验蠢霎室福。建福～州350002 摘要 将编码水稻瘤矮病毒 P3、P7、P8、Pn9、Pnl0、Pnl1、Pnl2的S3，S7，S8，．s9，S10，S11和S12基 因分 别克隆到酵母表达载体 pGBKT7和pGADT7中，转化AH109酵母细胞 ，结果显示 ：除 pGBK—S10转化子可 以在 SD／-Trp和 SD，．His营养缺陷固体培养基上正常生长外 ．其它转化子均只能在 SD／-Trp或 SD，． u营养缺陷固体 培养基上正常生长 。通过 (It一半乳糖苷酶活性分析揭示 ，除 pGBK—S10可以在 SD／一 一仅一Gal平板上生长并变 蓝外 ，其它均不变蓝 。结果证实 ：RGDV PnlO在酵母细胞 中具有转录激活活性 ，融合 GAL4的RGDVPnl0蛋 白可以在酵母细胞 内激活 H1S3和MEL1报告基因的表达 暗示该蛋 白可能在病毒的侵染和复制过程中参与调控 病毒或寄主基 因的转录表达 关键词 水稻瘤矮病毒 ；转录激活活性 ；酵母表达载体；PnlO 中图分类号 S435．11 水稻瘤矮病毒 (Rice Z,twirlvir ，RGDV)，属于呼肠孤病毒科 (Reoviridae)，植物呼肠孤病毒属 (Phytoreovirus)，同属还包括三叶草伤瘤病毒 (Woundtumorvirus，wTV)和水稻矮缩病毒 (Ricedwarf irus， RDV)[11。RGDV粒体为球状二十面体 ，含有双层衣壳蛋白，基因组由 12条 dsRNA片段组成 ，主要 由黑尾 叶蝉 (Nephotettixcincticeps)或电光叶蝉 (Recilimado )传播以持久性方式传播圜。RGDV泰国分离物p，41以 及 中国广西分离物is，句的全基因组已经测序完成 ，而 中国广东分离物除 ．s1、s4和 S5三个基因组片段 尚未 完成序列测定外．其余9个片段的序列都已完成测序fi~n] 由RGDV引起的水稻瘤矮病 ，是 中国、13本 、朝鲜以及东南亚国家水稻上 的一个重要病毒病害1[12]。 该病于 1979年首次在泰国发现l3【J，随后在马来西~t141、13本和韩 国㈣发生。在我 国，该病主要分布于广 东、广西和福建等局部地区9[]，但近年来呈现逐步蔓延扩展的趋势 ．对南方稻区造成严重危害。目前有关 RGDV的分子生物学主要集中在对病毒的基因组结构的研究4『1．而对于RGDV与寄主问的互作研究还未见 报道 。笔者利用酵母双杂交系统检测 RGDV S3，S7，58。S9，$10，s1l和 S12基因分别编码的 P3、P7、 P8、Pn9、Pnl0、Pnl1和 Pn12蛋 白的自激活特性 ．旨在为进一步研究 RGDV与寄主间的互作 以及病毒粒 体的装配和致病机制等提供科学依据 1 材料与方法 1．1 材料 水稻瘤矮病毒 RNA(中国广东分离物)由本所范国成博士提供 ，大肠杆菌 E．coliDH5et，酵母菌株 基金项 目：农业部农业公益性行业科研专项(No．nyhyzx07—051)，教育部博士点专项科研基金 (N0．20050389006)，福建省科技厅项 目(N0． KO3oo5)资助 作者简介 ：吴建国，1981年生，男，安徽人，博士研究生，研究方向：分子病毒学。E—mail：wujiangu081@126．com。 通讯作者，谢联辉，教授。研究方向：植物病毒学。Tel：0591E—mail：tjxlh@126．com。吴祖建．研究员。研究方向：分子病毒 学。Te1：0591E—mail：wuzujian@126．tom。 收稿 日期 ：2009—06一Ol 修回 日期 ：2009—07—03 9期 吴建国等 ：水稻瘤矮病毒 P3、P7、P8、Pn9、Pnl0、Pnll、Pnl2的酵母双