10贝类产品中诺沃克病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究.pdfVIP

2004 年 　　　　　　　　　　　　　　检验检疫科学 　　　　　　　　　　　　　　第 14 卷 　第 5 期 贝类产品中诺沃克病毒的实时荧光RT - PCR 检测方法研究 潘良文① 　张舒亚 　李晓虹 　严罗美 　李树清 　王巧全 (上海出入境检验检疫局) 　　摘 　要 :诺沃克病毒是一种分布很广泛的肠道腹泻病毒 ,主要存在于牡蛎、文蛤等贝类中。本研究建立了从贝 类中提取诺沃克病毒 RNA 的方法以及进行实时荧光 RT - PCR 检测的方法。 关键词 :诺沃克病毒 ;贝类;RT - PCR 1 　前言 甘氨酸缓冲液 :0. 1M 甘氨酸 ,0. 3M NaCl ,pH9. 5 ; ( ) PEG8000 - NaCl 溶液 :16 %PEG8000( 聚乙二醇 ,Sigma , 诺沃克病毒 Norovirus ,先前又被称为诺瓦克样 ( ) wt/ v) ,0. 525M NaCl ;2 ×RNA Binding Buffer :40mM Tris 病毒 Norwalk - like viruses , 简称 NLVs ,属杯状病毒 科、沃克病毒属 ,是一种分布很广泛的肠道腹泻病毒。 - HCl (pH7. 5) ,2. 0M LiCl ,4mM EDTA 。Wash buffer : ( ) 被诺沃克病毒感染后 ,出现以急性胃肠炎为主的临床 10mMTris - HCl pH7. 5 ,0. 15M LiCl ,1mM EDTA ;Dyn 症状 ,即水样腹泻、呕吐和腹痛等症状。若治疗不及 abeads - oligo ( dT) 25 ( Cat. No. 61005 , Dynal Biotech ) ( 时或治疗方法不正确 ,轻者影响人体的生长发育 ,严 Inc. ,Oslo ,Norway ; TRIzol RNA 抽提试剂盒 Introgen 重者可导致脱水死亡。在美国每年 2000 万人次的急 公司 , Cat. No. 15596 - 026) ; Tri - reagent RNA 提取试 ( ) 性肠胃炎是由诺沃克病毒引起的 ,它也是美国和欧洲 剂盒 Sigma 公司 ,Cat. No. T - 9424 ;Access RT PCR 病毒性肠胃炎爆发的主要原因。诺沃克病毒的传播 System (Promega 公司 ,Cat. A1250) 。 途径类似于甲肝病毒 ,主要是人 - 人接触传播和污染 2. 4 　实时荧光 PCR 引物和探针 ( ) 扩增的引物和探针序列[3 ] 见表 1 。 的食品和水源 ,其中污染的食品 主要是贝类产品 传 播是造成大规模、全球性传播的主要途径。