填料的载量（capacity）相关问题.pdfVIP

ÄKTA Club ÄKTA Club GE Healthcare GE Healthcare 填料的载量（capacity ）相关问题 （摘自GE 层析技术在线技术支持网站）   其中： 1.有效载量（静态结合载量， Available capacity ，仅针对吸附层析：离子交换、亲和层析、 C0 = 样品中目标蛋白的浓度（concentration of target solute in feed ） 疏水层析以及反相层析） VA = 穿透曲线中目标样品活性达到 5%C0 时上样的总体积（volume applied until the conc. of 有效结合载量也叫静态结合载量，是指在一定的条件下，可以结合在层析填料上的真实样 target solute in effluent has reached 5% of C0 ） 品的数量，它是使用真实的样品和介质充分浸润饱和，然后测定结合在填料上的样品总量。 VC = 总的柱床体积（total bed volume ） pH、离子强度、添加剂以及样品等因素都会影响有效结合载量。实验条件改变，有效结合载 量也会变化。在比较不同填料介质有效结合载量时，必须考虑到这些基本的条件。 3.凝胶过滤的样品载量 凝胶过滤的上样体积是一个受限的因素。除非蛋白质的初始浓度影响到样品的黏度（对 有效载量的测定步骤： 于不同的蛋白，这个样品浓度是不一样的），一般蛋白含量没有影响。如果精细分离或者蛋白 1)在试管放入 1ml 的填料（该体积是填料自然沉降后测定的体积），使用 10ml 结合缓冲液 鉴定，我们推荐上样体积不超过柱床体积的 1-2%。如果脱盐或者组分离，样品的体积可以稍 （平衡缓冲液）润洗填料5~10 次，充分平衡； 微大一些，上样体积为 10~20%体积。 2)去除多余的缓冲液，保证试管中缓冲液高于填料的体 积为 1ml； 4.离子交换的推荐的上样量 3) 向试管中加入 1ml 蛋白质的真实样品（目的蛋白浓度 对于一个给定的 IEX 填料，上样量是指每个单位体积的载量。对于分离实验，样品真实的 为 C0 ）； 上样浓度一般在 5~40%的静态结合载量（因为带有同样性质电荷的杂质也会结合在柱子 4)充分混匀试管中的物质，放置几分钟； 上）。样品越复杂，上样的比例越小。如果主要应用在样品的浓度