H7N9禽流感监测病例的病原谱分析.pdfVIP

H7N9禽流感监测病例的病原谱分析 褚维 宋黎黎 劳宝法 王宇 周建军 沈福杰 赵百慧 DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2013.012 基金项目：上海市卫生局青年科研项目（2013y104） 作者单位：200023 上海市黄浦区疾病预防控制中心微生物实验室（褚维、宋黎黎、劳 宝法、王宇）；上海市黄浦区疾病预防控制中心行政办公室（周建军）；上海市黄浦区疾病 预防控制中心急性传染病防治科 （沈福杰）；上海市疾病预防控制中心微生物实验室 （赵百 慧） 通信作者：赵百慧，Email:bhzhao@ 人感染H7N9禽流感病毒是一种新型重组禽流感病毒，编码血凝素(hemagglutinin HA) 的基因与分离自浙江鸭的禽流感病毒A/duck/Zhejiang/12/2011(H7N3)的一致性最高，编码神 经氨酸酶（neuraminidase NA ）的基因与韩国野鸟来源的禽流感病毒 A/wild bird/Korea/A14/2011(H7N9)的最为接近，而所有 6 个内部基因片段均来自禽流感病毒 [1] A/brambling/Beijing/16/2012(H9N2)病毒 。截止2013年5月17 日，中国10个省份共计报 告130例H7N9确诊病例。笔者对上海市各级医疗机构采集的 137份H7N9监测病例标本进 行了呼吸道病原的实验室检测和病原谱分析，现将结果报告如下。 一、材料与方法 1.标本来源：于2013年4月7 日至2013年5月8 日期间，接收每周一至周三夜间上海 全市各级医院感染科、呼吸内科、儿内科或重症监护室根据 《人感染H7N9禽流感疫情防控 [2] 方案》 诊断的H7N9病例，采集病例标本。 2.标本类型、保存与运输：采集病例上呼吸道标本 （鼻咽拭子、鼻腔抽取物、咽漱液和 鼻洗液等）以及下呼吸道标本（气管吸取物、肺洗液、痰液等）。采集后的标本保存于3ml 病毒采样液中，4 ℃保存，送至实验室。 3.标本的核酸提取：吸取140μl标本液，加入套管内，置于QIAcube全自动核酸纯化系 统（德国Qiagen公司）中，使用QIAampViralRNAMiniKit试剂盒（德国Qiagen公司）配 套程序进行病毒核酸的提取，抽提产物存储于100μl无RNA酶水中，4 ℃保存待检。 4.病毒的检测：在ABI7300荧光定量PCR检测仪 （美国LifeTechnologies公司）上采用 SuperscriptIIIplatinumone-stepqRT-PCRsystem（美国Invitrogen公司）试剂盒配合中国CDC 下发引物探针检测人感染H7N9禽流感病毒核酸，反应程序为45 ℃10min，95℃10min，（95 [3] ℃15s，60℃45s）×40循环，60℃采集荧光信号 ；采用实验用商品化荧光定量PCR检测 试剂盒检测各型别人季节性流感病毒、甲型H1N1流感病毒和H5N1/H9N2禽流感病毒核酸， 操作按试剂盒说明进行。 1 5.H7N9监测病例标本病原谱分析：检测甲型流感病毒 （InfA）、乙型流感病毒 （InfB）、 甲型H1N1流感病毒（InfA/H1N1pdm09）、呼吸道合胞病毒A和B型（RSVA/RSVB）、副 流 感 病 毒 1-4 型 （ PIV-1/2/3/4 ）、 冠 状 病 毒 OC43/229E/NL63/HKU1 （CoV-OC43/229E/NL63/HKU1）、鼻病毒 （Rhv）、肠道病毒 （EV）、腺病毒 （ADV）、人偏 肺病毒 （hMPV）和博卡病毒1型 （BoV-1）等18种病毒，以及肺炎衣原体 （C.Pneu)、肺炎 支原体 （M.Pneu）、嗜肺军团菌 （L.Pneu）和百日咳鲍特菌 （B.Pert)等共22种呼吸道病原体 核酸，采用RespiFinder®SMART22 多重荧光定量PCR试剂盒(荷兰PathoFinder公司）在 LightCycle480荧光定量PCR仪