生物制药工艺学 灭菌技术及微生物发酵操作方式.pptVIP

防止染菌的措施 　设备方面：要求发酵罐及其附属设备应做到无渗漏， 无死角。凡与物料、空气、下水道连接的管件都应保证 严密不漏，蛇形管和夹套应定期试漏。 空气净化系统方面：提高空气进口的空气洁净度，除尽 压缩空气中夹带的油和水，保持过滤介质的除菌效率。 定期检查更换空气过滤器过滤介质，使用过程中要经常 排放油水。 工艺方面：放罐后要进行全面检查清洗。（清理罐内残 渣，去除罐壁上的污垢等。） 空罐灭菌时要排尽罐内空气，灭菌时保持蒸 汽通畅，保证灭菌彻底。 实罐灭菌时要防止原料结块。 进入发酵罐的物料要保证无菌。 严格按照操作规程执行。 阀门试漏的方法 法兰连接的死角 渣滓在罐底与用环式空气分布管所形成的死角 不锈钢衬里的死角 接种管路的死角 如下图a所示有一小段管路存在蒸汽不流通的死角 解决办法：装设旁通（小放气阀） 排气管的死角 压力表安装不合理形成的死角 分批培养（batch culture or fermentation） 分批培养是指在一个密闭系统内投入有限数量的营养物质后，接入少量的微生物菌种进行培养，在特定的条件下只完成一个生长周期的微生物培养方法。 蒸汽 空气 发酵尾气 消泡剂 酸碱 特点： (1)整个培养系统与外界没有其它物质交换（O2、CO2、消泡剂、酸碱除外） (2)整个过程中菌的浓度、营养成分的浓度和产物浓度不断变化，是一种非稳态的培养方法。 10 0 16 时间 菌数的对数 分批培养过程中典型的细菌生长曲线 a b c d 问题 为什么说微生物分批培养是一种非稳态的过程？ 在分批培养过程中，随着微生长细胞和底物、代谢物的浓度等的不断变化，微生物垢生长可分为停滞期、对数生长期、稳定期和死亡期等四个阶段。 分批培养的优缺点 优点: 操作简单，周期短，染菌机会少， 生产过程和产品质量容易掌握。 缺点: 存在基质抑制的问题，产率低，不 适宜测定动力学数据。 连续培养（continuous culture） 连续培养是指微生物培养到对数生长期 时，在发酵罐中不断添加新鲜的培养基，同时 不断放出代谢物，使微生物细胞在近似恒定状 态下生长的培养方式。 特点：菌的浓度，产物浓度，限制性基质浓度 均处于恒定状态。 连续培养的优缺点 优点: 控制稀释速率可以使发酵过程最优化。 发酵周期长，产量高。 缺点: 长期连续培养会引起菌种退化，降低 产量。染菌机会增加。 应用：废水处理、葡萄糖酸发酵、酒精发酵等工业中。 补料分批培养（fed-batch culture） 介于分批培养和连续培养之间的操作方法。 补料分批培养是指根据菌体生长和初始培养基的特点，在分批培养的某些阶段适当补加培养基，使菌体或其代谢产物的生产时间延长。 4、补料分批培养的优点 料分批培养是介于分批培养和连续培养之间一种微生物细胞的培养方式，它兼有两种培养方式的优点，并在某种程度克服了它们所存在的缺点。 与分批培养方式比较 与连续培养方式比较 1、可以解除培养过程中的底物抑制、产物的反馈抑制和葡萄糖的分解阻遏效应； 2、对于耗氧过程，可以避免在分批培养过程中因一次性投糖过多造成的细胞大量生长、耗氧过多以至通风搅拌设备不能匹配的状况；在某种程度上可减少微生物细胞的生成量、提高目的产物的转化率； 3、微生物细胞可以被控制在一系列连续的过渡态阶段，可用来控制细胞的质量；并可重复某个时期细胞培养的过渡态，可用于理论研究。 1、不需要严格的无菌条件； 2、不会产生微生物菌种的老化和变异； 3、最终产物浓度较高，有利于产物的分离； 4使用范围广。 缺点： (1)由于没有物料取出，产物的积累最终导致 比生产速率的下降。 (2)由于物料的加入增加了染菌机会。 应用：面包酵母、氨基酸、抗生素等工业。 * * * * * * * 生物制药工艺学 在发酵生产中，为什么要进行灭菌操作？ 问题： 1、由于杂菌的污染，使生物反应中的基质或产物因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降； 2、由于杂菌所产生的一些代谢产物，或在染菌后改变了培养液的某些理化性质，使产物的提取和分离变得困难，造成收率降低或使产品的质量下降； 3、杂菌会大量繁殖，会改变反应介质的pH值，从而使生物反应发生异常变化； 4、杂菌可能会分解产物，从而使生产过程失败； 5、发生噬菌体污染，微生物细胞被裂解，而使生产失败，等等 杂菌污染的后果