人STAT3基因siRNA真核表达质粒的构建及鉴定.pdfVIP

· 974 · ：2009年 11月第 14卷第 11期 ChineseClinicalOncolo~v，Nov．2009，Vo1．14，No．11 人 STAT3基因siRNA真核表达质粒的构建及鉴定 210029 南京 南京医科大学附属南京第一医院肿瘤科 赵环宇，张维铭 ，陈锦飞 【摘 要】 目的：构建针对人STAT3基因的siRNA真核表达质粒，检测其在细胞水平对STAT3基因表达的抑制效果。 方法：用DNA重组技术将针对人STAT3基因mRNA序列不同位点设计的3个 siRNA序列克隆到真核表达质粒pRNAT—U6．1／ neo中构建重组体pRNAT—U6．1一siRNA，重组质粒经PCR检测及测序分析，用脂质体转染重组质粒至人食管癌Eca一109细胞， G418筛选获得阳性克隆，RT—PCR和Westernblot检测STAT3基因mRNA和蛋白的表达，筛选最佳沉默效率的siRNA。结果： PCR检测及测序分析结果均提示重组质粒构建正确。RTPCR和Westernblot检测证实pRNAT—U6．1一siRNA3具有最佳的沉默 效率。结论：成功构建人STAT3基因siRNA真核表达质粒，并证实其能够从mRNA和蛋白水平抑制STAT3基因的表达。 【关