人参皂甙Rb1和Rg1对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响.pdfVIP

第 33卷 ／第2期 ／ 河北师范大学学报 ／自然科学版 ／ VoI．33NO．2 2009年 3月 JOURNALOFHEBEINORMALUNIVERSITY／NaturaIScienceEdition／ Mar．2O09 人参皂甙Rbl和Rgl对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响 郭 淑 华 (潍坊学院 生物工程学院，山东 潍坊 261061) 摘 要 ：观察人参皂甙 Rbl(ginsenosideRbl，GRb1)和 Rgl(ginsenosideRgl，GRg1)对体外培养的小 鼠睾丸支持 细胞(sertolicel1)增殖的影响，探讨二者的药理作用机制 ．取原代培养传代～次第 3天的支持细胞 ．加入不 同浓度的 GRb1和 GRgl，利用 MTT比包分析法和 BrdU增殖细胞标记法 ，检测不 同浓度 GRbl和 GRgl对体外培养支持细 胞增殖的影响．结果显示，20mg／LGRbl对支持细胞增殖有明显促进作用，而不同浓度的GRgl对支持细胞的增殖 无明显影响．GRbl能维持小鼠支持细胞的存活，并在适当浓度范围内可以明显促进支持细胞的增殖，而GRgl对 支持细胞的增殖无明显影响． 关键词：人参皂甙 Rbl；人参皂甙 Rgl；支持细胞；细胞增殖 中图分类号 ：Q946 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000．5854(2009)02—0251—04 人参 由于具有化学成分多、生物活性广等特点，已经成为中国、韩国、日本 、欧洲以及北美等国家的研究 热点．人参皂甙 Rbl(ginsenosideRbl，GRb1)和 Rgl(ginsenosideRgl，GRg1)是人参发挥其生物活性的主要 有效成分 【．研究表明，二者有不同的药理作用：GRbl具有对抗溃疡、调节甘油三脂等功能[ ；GRgl具有 增强免疫 、调节神经系统等效应 ．5】．GRbl对应激 、性功能、体温调节 、清除 自由基等有显著改善作用 ，是通 过神经系统、下丘脑 、丘体 、肾上腺及性腺轴发挥作用 ；GRgl对学习记忆 、ITP、免疫功能及调节神经系统等 有显著改善作用，是通过脑皮层、海马、突触、淋巴因子等发挥作用 ]．为深入了解人参皂甙单体 GRbl和 GRgl的药理作用机制 ，笔者以原代培养的Sertoli细胞为模型，观察 GRbl和GRgl对它活力的影响，并 比较 分析了二者的药理作用的不同． 1 材料与方法 1．1 材 料 1．1．1 实验动物 正常健康出生 4～7d的KM小鼠，由北京动物所实验 中心提供 ． 1．1．2 主要试剂 人参皂甙Rbl、胶原酶 IV、二甲基亚砜 (DMS0)购 自Sigma公司；透明质酸酶 、胎牛血清(FBS)购 自GIB CO公司；DMEM ／F12，MTT购 自Invitrogen公司；BrdU，BrdU in．situdetectionkit为 Sigma公司产品． 1．2 实验方法 1．2．1 Sertoli细胞 的原代培养 出生 4～7d的KM小鼠颈椎脱 臼法处死，取出睾丸，放入培养皿中并加入适量 PBS，剥掉 白膜后将睾丸 切成小块．依次用胶原酶IV和胰酶消化离心后制成单细胞悬液，接种孵育2h，取出培养瓶轻轻晃动，换新培 养液继续培养过夜，细胞 3次贴壁后分别用 PBS清洗数次，细胞消化后进行计数，重新接种，按照试验要求 处理细胞 ． 1．2．2 MTT检测 GRbl和 GRgl对 Sertoli细胞的刺激增殖作用[·] 取传代一次第 3天的Sertoli细胞接种到96孔板中，细胞密度为 1．1×10个 ／mL，培养 12h后，无血清 培养 24h，加入GRbl和 GRgl，使其终质量浓度为 0，5，10，20，50mg／L，每孔加入 100 L无血清培养基，继 收稿 日期 ：2008一O9—12；修 回日期 ：2008一l0—18 基金项目：国家 自然科学基金 作者简介：郭淑华(1972一)，女，山东吕邑人，讲师，硬士，研究方向为生殖生理学 · 252 · 续培养48h，每孑L加入5g／LMTT，孵育 5h，去上清每孔加 l50_／LIDMS()，振荡 10nlin，酶联仪测 D IIl值． 1．2．3 Brdu标记法检测 GRbl