河北省部分地区奶牛流产病因分析和牛新孢子虫病PCR诊断方法的建立及应用.pdf

摘要 许多引起流产的传染性疾病对奶牛的繁殖和产奶造成严重损失，它们也是影响现 代奶牛养殖业发展的重要因素。这些传染性疾病主要有布鲁氏菌病、牛病毒性腹泻一 粘膜病、弓形虫病和新孢子虫病等。本研究首先选定河北省8个大型奶牛场，从2004 年3月至2006月2月采集流产奶牛血样、粪样以及流产胎儿病料共计536份，对其 分别进行了布鲁氏菌病、牛病毒性腹泻一粘膜病、弓形虫病和新孢子虫病的检测。采 用血清学和细菌学诊断并结合临床症状对牛布病进行诊断，阳性率为5．2％：利用本 是实验室建立的双抗体夹心EuSA方法检测牛病毒性腹泻一粘膜病，阳性率为31f3％； 新孢子虫病应用EuSA法，Ⅳ．加以扬聊抗体阳性率为19．8％；弓形虫病使用IHA间接 血凝检测方法，z暑彻枷抗体阳性率为1．7％；所有弓形虫抗体阳性血清中未检出新孢 子虫抗体，所有新孢子虫抗体阳性血清中也未检出弓形虫抗体。在此基础上，本试验 建立了诊断牛新孢子虫病的聚合酶链式反应技术。根据GenBaIlk上已发表的新孢子 虫№一5基因片段设计了一对特异性引物，用蛋白酶K法、盐析法和饱和酚／氯仿抽提 法分别提取牛新孢子虫Ⅳ叩^加“m抗体阳性血液的DNA并对其进行PCR扩增，经 2％琼脂糖凝胶电泳检测，扩增出长度约为350bp的片段。从琼脂糖凝