缺血性卒中后基因治疗现状与展望.pdfVIP

缺血性卒中后基因治疗的现状与展望 付 强 （山东中医药大学 山东 济南 250014） E-mail: fqtcm@ 摘 要：基因治疗有优于经典药物治疗的特点。如可直接将 DNA 注入脑内，在相对局部环境， 提供高浓度治疗剂；基因治疗也比传统药物提供更长的作用时间等。近几年随着基因载体和 导入技术的应用和拓宽，缺血性卒中基因治疗研究已蓬勃发展起来，最新成就令人鼓舞，但 应用于临床仍还有许多问题亟待解决。本文对基因治疗缺血性卒中的机理、方法、转移载体、 基因传递系统及转移方式等方面的研究进行综述。 关键词：缺血性卒中；基因治疗；综述 1. 引 言 缺血性卒中是一种常见、多发病，多在中年期后发病。由于其并发症、致残率及死亡 率均较高，因而严重威胁着人类的健康和生命。急性缺血性卒中治疗的目标是挽救梗死灶周 围的缺血半暗带或半影区(penumbra)，为此，临床上采用扩容、抗凝、溶栓、钙通道阻滞剂、 NMDAR 拮抗剂、抑制性氨基酸和自由基清除剂等方法试图增加半暗带的血液供应，或保护神 经组织，减轻神经组织损伤，但目前还没有任何一种方法可以单独达到目的。 2000 年 6 月 26 日，人类核基因组测序宣告完成。基因疗法已成为临床治疗缺血性卒中 的一个新思路。随着近年导管血管基因转移技术的成熟，特别是颈动脉和颅内血管基因转移 在体内和体外(in vivo and in vitro)的成功实施，使缺血性卒中的基因治疗研究不断发展， 并就目前的研究基础提出了未来研究的方向，现综述如下： 2. 基因治疗缺血性卒中的机理 缺血后的脑组织可分为：缺血中心区、围绕梗死中心的半暗带以及围绕半暗带的周边带。 脑缺血的基因治疗是在半暗带注入外源性基因或改变神经元的基因表达，使组织通过改善血 流动力学或改变特殊的分子、细胞学和生物学机制，从而保护或抑制神经元的损伤。基因治 疗的基本目标是采用高效的表达载体 （如腺病毒）或DNA阳离子脂质体复合物与病毒结合体， 将目的基因cDNA导入脑血管或血管周围组织，并表达有利于血管生长或调控周围组织功能的 物质。从而促进血管内皮增生、形成新生血管、抑制炎症反应和自由基等的毒性作用及抑制 [1] 细胞凋亡等 。 对于中枢神经系统等无法反复操作的部位，尝试基因治疗是有意义的。与以往的疗法相 比，基因治疗的优势在于它可以持续表达细胞趋化或生长因子，对靶细胞产生较为持久的作 用，但基因载体的免疫源性可能会带来一些远期的不利影响。 3. 缺血性卒中的基因疗法 3.1 转 Bcl－2 基因 - 1 - 为了进一步证明Bcl－2 在脑缺血中的作用，近年来许多学者运用转基因技术使凋亡抑 制基因Bcl－2 过度表达以保护神经元不致发生死亡。Shimazaki等[2]在前脑缺血 5d前转导 rAAV载体介导的Bcl－2 基因（AAV－Bcl－2），可阻止CA1 区神经元DNA断裂，而且，AAV－ Bcl－2 在缺血后 1h应用也可阻止CA1 区神经元DNA断裂。这些结果表明，Bcl－2 蛋白有神经 保护作用，能抑制缺血细胞死亡。近年来Cao等[3]用结构型巨细胞病毒启动子 （constitutive cytomegalovirus promoter, pCMV）和以缺氧诱导的促人血管内皮生长因子（pHRE）为基础 的两种不同类型的质粒介导Bcl－2 表达。将带阳离子的脂质体/质粒DNA复合物在MCAO后立 即注入大鼠脑脊液中，48h后对治疗组和对照组梗死体积和凋亡细胞数进行分析。结果发现， pCMV－Bcl－2 组梗死体积明显缩小，但pCMV－Bcl－2 组和pHRE－Bcl－2 组梗死区和半暗带 凋亡细胞数均较对照组明显减少，且脂质体/质粒复合物进行脑脊液注射短期内无不良反应。 以上不同的实验方法都表明，转Bcl－2基因对缺血性脑血管病的治疗有效。 目前，虽然转Bcl－2 治疗缺血性卒中的实验研究都取得了很好的结果，但其作用机制