DIG和碱性磷酸酶标记cDNA探针检测番木瓜PRSV比较.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2007,15 (3): 496~502  ·研究论文 · 地高辛(DIG)和碱性磷酸酶标记 cDNA探针检测 PRSV*  ** ,  姜 玲  ， 张红艳 ，张明涛 ，刘小梅 伏 卉  (华中农业大学园艺林学学院,教育部园艺植物生物学重点实验室，国家果树脱毒种质资源室内保存中心， 武汉 430070)  GenBank PRSV( ) Sm ， 设计特异引物 ， 以美 中红(  摘要: 根据 发表 的 番木瓜环斑病毒 中国 株系的外壳蛋 白基 因序列 L.cv.Meizhonghong) RNA RT ­PCR , cDNA pGEM­T easy 带病样品的 为模板进行 扩增 将其目的 片段克隆到 质粒载体 上。以重组质粒作模板 ， 用 PCR­DIG标记方法制备 cDNA探针， 另一种非放射性探针是经凝胶电泳分离 、 纯化 cDNA 片段 ， 用 碱性磷酸酶直接进行标记。 利用地高辛(DIG)标记和碱性磷酸酶直接标记 的 cDNA 探针核酸分子杂交及 RT­PCR方法对 PRSV 。结果表明， (1) No.2 Sm 94.7% (2)DIG 3 cDNA 进行了检测 测序结果表 明美中红 序列与中国优势株系 的同源性为 ； 标记的 种 (861 455 215bp) RNA , 861bp RT ­PCR 探针 ， 和 对样品的总 检测结果一致 且 的探针杂交斑点最为清晰 ， 上述核酸杂交结果与 ； 检测结果相符, 核酸分子杂交检测的灵敏度和特异性能满足常规检测的需要 (3)碱性磷酸酶直接标记 861bp 的 cDNA 探针可 ； PRSV (4)DIG , RT ­PCR 进行 的斑点杂交检测 ， 可获得有效 的杂交结果 标记探针对 叶脉进行 了印迹杂交检测 结果与 检测结 果相符 。 ； 杂交； 关键词: 番木瓜环斑病毒(PRSV)； 地高辛(DIG)标记探针； 碱性磷酸酶直接标记 RT ­PCR  中图分类号: S188  文献标识码:A  文章编号