10实验十卵磷脂.pptVIP

卵磷脂（Lecithin）的结构 卵磷脂属甘油磷脂，其脂肪烃链可以是硬脂酸、软脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸及花生四烯酸等。磷酸的两个羟基分别与甘油的一个羟基及胆碱的?-羟基之间形成磷酸二酯键，因甘油羟基有?位及?位两种，因此存在?-卵磷脂和?-卵磷脂。 卵磷脂提取的方法主要有有机溶剂法、无机盐复合沉淀法、乙酸乙酯纯化法、超临界CO2萃取法等方法。其中有机溶剂法是根据蛋黄中各组分在溶剂中的溶解度不同而进行分离的，该方法提取卵磷脂具有分离效率高、生产周期短、易实现自动化等优点，但是所得产品的卵磷脂纯度不高。无机盐沉淀法是利用卵磷脂和无机盐中金属离子发生配位反应，形成配合物产生沉淀的性质把卵磷脂从有机溶剂中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂分离出无机盐和磷脂杂质，这样可以大大提高卵磷脂的纯度，但此工艺除杂步骤复杂。本实验利用有机溶剂法来提取卵磷脂，用无机盐复合沉淀法对产品进行纯化处理，得到纯度较高的精制卵磷脂，并用消化定磷法测定产品的含磷量，以此评价产品质量。 有机溶剂法提取卵磷脂 室温下，取10 mL新鲜蛋黄用两倍体积的95%乙醇进行提取，于25 ℃混合搅拌15min， 3000 rpm离心5 min，取上清液，收集于一个重量已知的烧杯中，将沉淀物重复抽提4次后，将收集上清液于60℃（沸水浴）蒸馏至近干，加入丙酮，分离沉淀物，（真空）干燥30 min，得到淡黄色粗制卵磷脂，称重。 金属离子复合沉淀法纯化卵磷脂 将卵磷脂粗品用无水乙醇溶解，得到约10％的乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂质量10％的ZnCl2盐溶液，室温搅拌30 min，分离沉淀物，加入丙酮，洗涤搅拌lh，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液无色为止，得到白色蜡状的精制卵磷脂，真空干燥，称重。 定磷法测定卵磷脂的含磷量 (1)标准曲线的绘制：取12支洗净干燥的玻璃试管，按下表加入标准磷溶液、水及过硫酸钾，平行实验2次，绘制标准曲线。 (2)产品检测：称取5mg卵磷脂提取物，加入30mL 100g/L过硫酸钾，与标准品一起于121 ℃消解30min，取1mL消解后的样品加2mL蒸馏水以及标准品，加入3mL定磷试剂，混匀，45℃水浴保温25min，660nm测光吸收值（A）。根据标准曲线计算精制卵磷脂的含磷量。 应用 临床上用于治疗婴儿湿疹、神经衰弱、肝炎、肝硬化及动脉粥样硬化等。本品也可用作化学试剂。 预习《生物化学与分子生物学实验教程》p114实验十五 * * 实验十 药物研制工艺 ——卵磷脂工艺路线 刘艳丽 生科院249室 实验目的：学习掌握卵磷脂提取制备方法 实验原理： 实验器材：可见光分光光度计、真空干燥箱、水浴锅、离心机、搅拌器、电子天平、试管、灭菌锅 实验试剂：鸡蛋黄，95%乙醇，丙酮，ZnCl2，标准磷酸二氢钾溶液（0.32mM），100g/L过硫酸钾，定磷试剂 CH2OCOR1 CH2OCOR2 CH2OPO3CH2CH2N+(CH3)3 CH2OCOR1 CH2OCOR2 CH2OPO3CH2CH2N+(CH3)3 ?-卵磷脂 ?-卵磷脂 卵磷脂存在于动物各组织及器官中，脑、精液、肾上腺及红血球含量最多，卵黄中含量高达8％～10％，其在植物组织中含量甚少，唯大豆中含量甚高。 卵磷脂为白色蜡状物质，无熔点，有旋光性，在空气中因不饱和脂肪酸烃链氧化而变色。极易溶于乙醚及乙醇，不溶于水和丙酮，为两性电解质，pI为6.7，为较好的乳化剂。 卵磷脂性质 1 工艺路线：? 卵磷脂制备 新鲜鸡蛋 蛋清 蛋黄 加乙醇搅拌 3000rpm离心5min 取上清 60℃蒸馏至近干 干燥，得粗制卵磷脂 乙醇溶解，加入ZnCl2 分离沉淀物，洗涤 干燥，得精制卵磷脂 测定磷含量 2 工艺过程：? 2 工艺过程：? 121 ℃消解30min 1 10 1.0 1.0 6 1 8 1.2 0.8 5 1 6 1.4 0.6 4 1 4 1.6 0.4 3 1 2 1.8 0.2 2 1 0 2.0 0 1 过硫酸钾 相当于无机磷量(?g) 水 标准磷溶液(mL) 编号 2 工艺过程：?