动物线粒体DNA提取原理和方法.pdfVIP

蚕 学 通 讯 第22 卷 第3 期 24 Newslette of Se icultu al Science 2002 年 9 月 * DNA X XX 夏玉玲 刘彦群 鲁 成 ( 西南农业大学蚕学与生物技术学院农业部蚕桑学重点实验室 重庆 400716) 、、DNA , DNA , DNA , 。 DNA 线粒体是存在于绝大 数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器。它是细胞进行氧化磷 酸化的场所。线粒体基因组不仅是研究DNA 结构与复制转录的良好模型, 也是研究真核细胞 核酸与蛋白质合成非常合适的模型系统。线粒体基因组与核基因组的同源基因结构对比也被 广泛应用于核基因和核外基因的进化研究中。由于线粒体基因在真核生物具有高保守性, 所 [ 1] 以它已成为了研究物种进化的一种常用的标记, 并为线粒体起源提供有价值的线索 。 动物线粒体DNA 具有分子量小、结构简单、母性遗传和进化速度快等特点, 已广泛应用于 [2] 动物群体遗传学和进化生物学等领域的研究 。进行动物线粒体DNA 方面意义重大, 现将线 粒体DNA 的提取的原理和方法介绍如下: 1 提取动物线粒体DNA 的原理 1. 1 线粒体是由内外两层膜组成, 外膜光滑, 内膜向内回旋折叠, 形成许 横隔。线粒体中含 有 种氧化酶, 在此进行TCA 循环、呼吸连电子传递和氧化磷酸化等产能作用, 并传递和储存 所产生的能量, 是细胞的动力工厂和生物氧化的主要场所。线粒体的形状、大小、数目和组成, 在不同生物、不同组织以及生活于不同条件下的细胞中变化很大。线粒体的外型呈 样化, 绝 大 数类型细胞呈圆形、卵原形, 也有呈杆状的。其体积大小不等, 一般直径比较一致, 为0. 5 ~ 1. 0Lm, 长度为1~ 5Lm, 最长可达到7Lm 。线粒体的数目与生物种类、组织、细胞类型和细胞 生理功能变化有关。锥虫和有的真菌只有一个线粒体, 大 数动物的肝脏细胞含有上千个线 粒体, 生殖细胞如卵母细胞可达到30 万个线粒体, 家蚕的每个后部丝腺细胞只有2~ 4 个线粒 [ 13] 体 , 而有的细胞根本没有线粒体; 在细胞生命活动旺盛时, 它的数量 , 在衰老时, 数量少, 有时可能消失; 新生细胞比衰老细胞或病变细胞的线粒体 。 线粒体的主要成分是蛋白质( 占干重60~ 65%) 和脂类( 占干重35~ 40% ) 。此外还有少 量的核酸( 主要为DNA 和RNA) 、金属离子、阴离子和维生素等。其中线粒体膜主要成分是蛋 白质、脂类和一些酶, 基质由各种酶、DNA、RNA、金属离子、阴离子和维生素等组成。mtDNA 不 X 国家自然科学基金项目资助( 项目编号: XX 通讯作者 3 期 夏玉玲等: 动物线粒体DNA 提取的原理和方法 25 与组蛋白相结合, 它们排列紧密, 而象细菌体那样形成为环状裸露的双链DNA 。 不同物种的线粒体基因组DNA 大小悬殊。一般植物的线粒体基因组DNA 较大, 其分子 大小范围为: 186~ 2400kb; 原生动物线粒体基因组DNA 为 18. 5~ 55kb; 真菌的线粒体基因组 DNA 大小在17. 6~ 115kb 之间; 动物线粒体基因组DNA 较小, 约为15. 7~ 19. 5kb 。 线粒体在功能上受核制约, mtDNA 的复制、转录和翻译过程离不开核基因组的指导与调 控。但它有一套自主装置的基本成分