PCR技术在羊早期胚胎性别鉴定中的应用.pdf

72五190 矿 ^ 摘 要 本试验根据牛、绵羊、山羊SRY基因间的同源序列设计2对嵌套式引物作为牛、 绵羊、山羊雄性特异性引物；根据绵羊0．珠蛋白基因序列设计1对常染色体引物作为 内标引物，并根据这个引物组合建立了羊早期胚胎性别鉴定PCR反应体系。针对巢式 PCR，对两步控温方式和三步控温方式进行了扩增时间和扩增效果方面的比较。同时用 所设计引物对人、小鼠、牛基因组DNA进行扩增，检测引物的特异性。另外还对胚胎 性别鉴定过程中可能存在的污染因素进行了研究分析。用44只公羊、19只母羊(包括 山羊和绵羊)的血液基因组DNA样品进行巢式PCR扩增，结果表明公羊可以扩增出 蛋白基因片断，性别鉴定结果与实际性别完全一致，准确率为100％。以基因组DNA为 模板的巢式PCR采用两步控温方式能有效缩短扩增时间，而且扩增效果与三步控温基 本相同，都能达到准确鉴定的目的。本试验所设计引物的特异性检验结果表明，SRY基 因引物对牛、绵羊、山羊雄性特异，另外鉴定结果不受操作者性别的影响。 用本试验建立的PCR反应体系鉴定经超排处理获得的绵羊和山羊胚胎，对70枚胚 胎的鉴定结果表明，SRY基因引物和$．珠蛋白引物能够鉴定1，4～1／5的胚胎(囊胚) 样品性别，而且试验结果的可重复性较高。同时分别用NARISHIGE显微操作仪辅助取 样和徒手切割法对小鼠桑椹胚和囊胚取样进行比较，结果表明本试验中采用徒手切割法 更灵活、简便易于在生产现场进行操作，但此方法不易精确控制取样细胞数量。对试验 中所使用的冲卵液和保存液是否对试验结果产生污染的研究表明，本试验中使用的血清 纯度较高，不会对鉴定结果产生影响。本试验中建立的胚胎性别鉴定体系可以在实际生 产中推广应用。 关键词：SRY基因；引物：巢式PCR；控温；早期胚胎；性别鉴定 Summary to the PCR were identifyearly ofnested designed T、voDais primers tothe in and and bovine，sheep of homology sex according embryossheepgoat doneinvirtueto SRY otherof werealso goat pairprimer gene．Meanwhile，me control to of asinternal gene gene p—globin sheep sequences of and was