小儿肾母细胞瘤血清蛋白质标记物检测及意义.pdfVIP

郑州大学2007届硕士论文 d,JL肾母细胞瘤血清蛋白质标记物检测及意义 小儿肾母细胞瘤血清蛋白质标记物检测及意义 硕士研究生 张蛟 导 师 王家祥教授 中文摘要 研究背景 腹膜后实体肿瘤。自90年代以来，肿瘤手术切除率近于i00．0％，5年生存率达到 80．096。由于肾母细胞瘤为先天性疾病，发病年龄较低，儿童又有其自身特点无 法及时准确感知病情，且目前世界范围内缺乏行之有效的早期检测手段，已有的 B超、cT、静脉肾盂照影(IVP)等检查手段只有当肿瘤长到一定大小时才能被 发现， 尚无法满足临床无创、简便、高效、快速的早期诊断要求。临床需要特 异性好、灵敏度高、无创、痛苦小的肿瘤标记物，特别是血清标记物的研发及其 相应检查方法的建立。蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和技术平台。 本研究用蛋白组学的表面增强激光解吸电离一飞行时间质谱(SurfaceEnhanced Laser Timeof Desorption／IonizayionFlight-Mass 技术和生物信息学的方法，分析肾母细胞瘤患儿、其他小儿腹腔实体肿瘤患儿和 正常小儿的血清中的差异蛋白，筛选出特异的蛋白质标记物，探讨用于肾母细胞 瘤早期诊断的血清蛋白质指纹图谱模型，以建立高特异性和敏感性的肾母细胞瘤 诊断模型，同时评价该模型对肾母细胞瘤诊断的应用价值。 研究目的 检测肾母细胞瘤患儿血清蛋白质，筛选特异的蛋白质标记物，构建用于肾母 细胞瘤早期诊断及鉴别诊断的血清蛋白质指纹图谱模型，并探讨基于支持向量机 的血清蛋白质指纹图谱模型在。肾母细胞瘤诊断中的应用。 材料与方法 1．材料 1．1标本75例血清标本：肾母细胞瘤30例，其他腹部实体肿瘤25例(神 郑州大学2007届硕士论文 小儿肾母细胞瘸j|lL清蛋白质标记物检测及意义 经母细胞瘤9例、肝母细胞瘤5例、胰母细胞瘤2例、腹膜后恶性畸胎瘤5例、 横纹肌肉瘤3例、肾上腺皮质癌1例)，正常对照组20例。所有恶性肿瘤标本 均经病理证实。肾母细胞瘤组男16例，女14例，平均年龄2．8--+0．1岁。其他 小儿腹部实体肿瘤组男1l例，女14例，平均年龄3．5-+0．1岁。正常对照组与 肾母细胞瘤组年龄、性别相匹配。 EnhancedLaser 1．2设备表面增强激光解析电离一飞行时间质谱(Surface Time DesorptionflonizationofFlight-Mass +CiphergenInc．美国)。主要参数：收集范围为1000—50000；优化范围为 2000—30000． 1．3芯片弱阳离子交换(WCX2)蛋白芯片。 1．4应用软件和标记物评价指标 SoRware3．1，Biomarker Data 应用软件：Proteinchip Analyze System软件包。 支持向量机(svM)：MATLAB6．50SU．SVM工具箱。 评价实验的指标：灵敏度、特异性、Youden指数。 2．方法 2．1血清样本处理： U9溶液处理冰浴中解冻的血清标本，lOOMraNaNC(PH=4)稀释后，和 Bioprocessor预处理过的WCX2蛋白芯片结合反应60min，上述NaNC缓冲液清 洗芯片，取出芯片风干后点50％饱和的SPA溶液，上机读片． 2．2SELDI操作： SELDI质谱仪完成设置后，记录每一例样本的血清蛋白质质谱图。原始数据 Software3．1做校正，使总离子的强度及分子量均一化。用 先用Proteinchip Biomarkcr Data Wizard和ZUCI-ProtdnChipAnalyzeSystem软件包过滤噪音局部 极值的方法找出样本各自的峰，并过滤信噪比小于2的峰，以10％为最小阈值做 ’聚类分析，得到初步筛选结果。 2．3血