栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒基因克隆及核酸诊断技术建立.pdfVIP

栉孑L扇贝急性病毒性坏死症病毒基因克隆 及核酸诊断技术的建立 摘 要 给我国贝类养殖业造成了巨大的损失，通过流行病学调查、病理学分析和人工感 染实验已经证实是由栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒(怂，NV)造成的。本研究 利用差速离心和蔗糖密度梯度离心分离纯化AVNV后，用蛋白酶K裂解法抽提 II反转 库，通过蓝白斑显色、PCR反应和酶切分析相结合筛选阳性重组子，测定了重 组cDNA克隆的部分序列并进行了序列分析，最终从中筛选出23#、52#特异重组 eDNA克隆。 在23#、52#重组质粒基础上，设计2对特异性引物，预计目的产物分别为 RT-PCR检测方法，本方法具有较高的灵敏度和较强的特异 准确、灵敏的AVNV 性，以P23F、P23R为特异性引物的RT—PCR检测AVNV RNA的检出灵敏度为lpg， 以P52F、P52R为特异性引物的RT—PCR检测AVNVRNA的检出