猪传染性胃肠炎病毒特异性受体APN功能区的初步鉴定.pdfVIP

《黑龙江畜牧兽医》科技版 2009年6月(上)21 猪传染性 胃肠炎病毒特异性受体 APN 功能区的初步鉴定 刘博奇，李广兴，王 衡，尹杰超，李一经，王君伟，张赘硕，任晓峰 (东北农业大学 动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030) 中图分类号：$852．65 文献标识码：A 文章编号：1004—7034(2009)06—0021—03 关键词：猪氨肽酶N；蛋 白表达；受体 摘 要：试验为了构建猪氨肽酶N(pAPN)不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化，经 Western—blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区。试验构建重组 了质粒 pET30a—pAPN1 (106～669nt)、pET30a—pAPN2(670一l044nt)、pET30a—pAPN3(1045一l773nt)、pET30a— pAPN4(1774～2328nt)、pET30a—pAPN5(2329—2889nt)、pET30a—pAPN6(106—1044nt)、 pET30a—pAPN7(1774—2889nt)；转化宿主茵BL21(DE3)细胞，IPrrG诱导表达蛋 白，包涵体经 SDS聚丙烯酰氨凝胶 电泳回收纯化；用Western—blot、ELISA方法经抗 pAPN多克隆抗体初步筛选 出 pAPN受体功能区。结果表明：pET30a—pAPN2、pET30a—pAPN3、pET30a—pAPN6、pET30a—pAPN7 蛋 白均 以包涵体形式表达并纯化。pET30a—pAPN3、pET30a一6、pET30a一7能与抗 pAPN多抗产生 特异性反应。经抗pAPN多抗筛选初步鉴定出其主要抗原功能区在 36—153aa、349—591aa、592～ 963aa内 InitialidentificationofthedomainofTGEV specificreceptorAPN LIU Bo—qi，LIGuang—xing，REN Xiao—feng，etal (CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgnculturalUniversity，Harbin150030，China) Keywords：PorcineaminopeptidaseN；proteinexpression；receptor Abstract：RecombinantplasmidsencodingthedifferentregionsofaminopeptidaseN (APN)，suchaspE~0a—pAPN1(106～669nt)， pET30a—pAPN2(670～1044nt)，pET30a—pAPN3(1045～1773nt)，pET30a—pAPN4(1774—2328nt)，pET30a—pAPN5(2329～ 2889nt)，pET30a—pAPN6(106～1044nt)andpET30a—pAPN7(1774～2889nt)，wereconstructedinthisstudy，andtheywerein- ducedtoexpresstheproteinsofinterest，thenWestern—blotandELISAwereusedtoidentifythedomainofAPN withthespecificanti—pAPN polyclonal sera．Theresultsofthisexperimentrevealed thattherecombinantproteinsofpET30a—pAPN2，pE~ 0a—pAPN3，pET30a— pAPN6andpET30a—pAPN7wereexpressedintheshapeofinclusionbody，andrecombinantproteinsofpET30a—pAPN3，pET30a—pAPN6 andpET30a——pAPN7couldreactwiththeanti——pAPN polyclonal