A组乙型溶血性链球菌DNaseB基因亚克隆及pET-28a（＋）-DNaseB载体构建.pdfVIP

维普资讯 第 23卷 第 6期 福建师范大学学报 (自然科学版) Vo1．23 No．6 2007年 11月 JournalofFujianNormalUniversity (NaturalScienceEdition) NOV．2007 文章编号：1000—5277(2007)06—0097—05 A组乙型溶血性链球菌DNaseB基因亚克隆 及pET一28a(+)-DNaseB载体构建 潘 琴h，王 滔。”，陈骏扬 ，黄祖新h (1．福建师范大学生命科学学院，福建 福州 350108； 2．发育与神经生物学福建省高等学校重点实验室，福建福州 350108； 3．福建省立医院儿科，福建 福州 350001；4．福建省立医院儿科研究室，福建 福州 350001) 摘要：运用PCR扩增技术，以质粒pMD18-T—DNaseB为模板，扩增出0．5kb截短的DNaseB基因，先 将该基因片段与pMD19-T载体连接，确定该序列正确并进行大量繁殖后，再将DNaseB基因定向克隆入 pET一28a(+)表迭载体中，构建新的原核表迭载体pET一28a(+)一DNaseB，转化该重组质粒至受体茵E．coli DH5a中，采用SDS碱裂解法提取该质粒DNA，经EcoR1和HindⅢ双酶切鉴定和核苷酸序列分析，证实插 入的基因片段具有正确的DNaseB基因核苷酸序列，将pET一28a(+)-DNaseB转化至大肠杆茵BL21(DE3) 中，经过IPTG诱导其 目的蛋白得到了表达． 关键词：A组 乙型溶血性链球茵；DNaseB基因；亚克隆 中图分类号；Q36 文献标识码：A SubcloningofDNaseB Genefrom GroupA ofStreptococcusand ConstructingpET一28a(+)一DNaseBPlasmid PANQin ，WANGTao。，CHEN Jun—yang，‘HUANG Zu—xin。 (1．CollegeofLifeSciences，FujianNormalUniversity，Fuzhou350108，China； 2．StateKeyLaboratoryofDevelopmentalBiologyandNeurobiology (FujianNormalUniversity)， Fuzhou350108，China；3．PaediatricOfficeofFujianProvincialHospital，Fuzhou 350001，China；4．PaediatricLaboratoryofFujianProvincialHospital，Fuzhou350001，China) Abstract：A 0．5kbdock—tailedDNaseBgenefragmentwasamplifiedbyPCR from plasmidpMD18-T— DNaseB ．InordertOidentifyitscorrectnessandreproducethisgeneabundantly．First，thetargetgenefrag— mentwasclonedintopMD19-T．ThentheDNaseBgenewassubclonedintopET一28a(+ )resultingpET一28a (+ )一DNaseB．TherecombinantplasmidwastransformedintoE．coliDH5a．TherecombinantplasmidDNA wasextractedbySDSAlkalineLysisMethodandpurified，andwasstudiedindetailbyrestrictionendonucle— aseandnueleotidesequencing．Theresultshowedthatthenucleotide