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第十五章 生物技术应用 第一节 细胞和组织培养的应用 植物组织培养 一 体细胞变异体和突变体 1. 基本概念 2. 组织培养获得变异体或突变体的方法 （1）. 组织培养之前的变异及其选择：体细胞变异---分离---组培---再生为植株。 以烟草抗除草剂的变异体筛选为例，说明其选择过程： （2）组织培养期间的变异及其选择：指在组培过程中对培养物（愈伤组织）施加某种处理，使之发生变异后再进行选择。这种方法往往能收到比较好的效果。 玉米抗小斑病的T小种突变体的筛选过程： Gengenbach,B.G.（1975）用玉米小斑病的T小种毒素在感病的玉米培养物中进行筛选，经过愈伤组织培养以及毒素的继代培养，最后获得了抗性愈伤组织并诱导出再生植株。 过程：感小斑病的幼培----愈伤组织----加毒素----抗性愈伤组织----再生植株----抗小斑病 （3）组织培养后的选择和鉴定：指对组培后的植株的一些变异进行选择、利用的方法。 原理：诱变剂的继续作用 主要是形态性状，如株型、叶色等； 这种选择方式中所用的培养基一般不包含特定的选择因素，但往往包含诱变剂，由此产生的变异植株可能出现某种有益的变异，将再生植株种在田间或温室内进行选择。这种选择多局限于形态性状，如株型、叶色以及其他可见的性状。 3. 体细胞无性系选择中应注意的问题 （1）选择目标的确定（选择前的准备工作）： 主要考虑三个因素： ① 性状的意义，如抗逆性，品质等； ② 目标性状基因的数目；单基因易于识别；多基因难识别； ③ 考虑该性状的显隐性； 显性的当代表现， 隐性的下代表现 3. 体细胞无性系选择的问题 （2）外植体的选择：外植体（explant）是指用来进行培养的植物体某一部分组织的统称。选择外植体要考虑： ① 基因型；选易于组培的品种 ② 植物的合适部位；分生组织 ③ 考虑它的合适年龄；玉米幼胚10～11天 （3）培养系统的选择： 器官发生系统--再生植株由愈伤组织直接分化而成）； 胚胎发生系统---外植体首先形成愈伤组织，再由愈伤组织分化出来类似于种子胚的胚状体（embryoid），胚状体进一步发育成熟而形成完整植株 （4）无性系变异的选择：无性系变异通常在愈伤组织阶段就有所表现，但是它在再生植株中却有可能不再出现，而且并非出现在植株上的变异都能遗传，因此必须选择到目标性状稳定才算成功。 通常具有目标性状的无性系变异植株往往同时具有并发的其他不良的变异。解决这类问题的办法有二： 一是在大量无性系中筛选具有尽可能少的并发变异的个体； 其次是选用两个都具有目标性状的无性系杂交，从他们的后代中筛选没有不良变异的重组体。 二 离体培养技术的应用 （1）胚珠或子房培养及试管受精 克服远缘杂交不亲和性的有效方法，1967年Zenkteler 采用试管受精法，克服了石竹科内远缘杂交的不亲和性。他在异株女蒌菜和红色女蒌菜的种间杂交中和异株女蒌菜的属间杂交中，采用离体培养子房、人工授精的方式，使受精过程正常进行，并发育成良好的胚，取出胚进行离体培养，获得了开花的F1株。 （2）离体胚的培养的应用 1. 使远缘杂种的胚发育成植株： 1925年Laibach首先在亚麻属的中间杂种中采用了这一方法， 1991年李浚明等用普通小麦品种农大146作母本，簇毛麦作父本，经有性杂交和杂种未成熟胚培养，成功地获得了杂种植株； （2）离体胚的培养的应用 2. 促进核果类植物胚的后熟作用：早熟品种与晚熟品种杂交，很难得到杂交后代.用幼胚离体培养就能得到杂交后代，因此在核果类早熟性育种中常采用这种方法； 3. 打破种子的休眠期；用离体胚培养法，几天就可长成幼苗，大大缩短了育种年限。 三 细胞和组织培养的其他用途 （1）快速繁殖 通过分生组织的培养，可以快速繁殖有经济价值的植物，如花卉、药材等，有些植物应用次法，一年可以产生106~107个植株。 如广西用此法繁殖甘蔗苗比常规法效率高1000倍以上。由此法产生的植株一般都整齐一致，尤其是对特别宝贵的基因型，用此法扩繁更有意义。 方法有愈伤组织培养和丛芽培养等。 （2）种质保存 有些植物种质的保存已经正式采用组培方法，荷兰的所有甜菜种质都是用此法保存的，当然这并不意味着不再应用种子。 （3）产生无病毒植物材料 通过茎尖培养可以淘汰病毒，还可能淘汰某些细菌，这对于营养繁殖的植物是非常重要的。目前国内很多植物都是通过这种手段脱毒，由此而得到的后代可以大大提高产量。 （4）花药培养 通过花药培养进行单倍体育种。 第二节 植物原生质体培养和体细胞杂交 基本概念 1. 原生质体 原生质体：指用特殊方法脱去细胞壁的、裸露的、有生活力的原生质团。就单个细胞而言，除了没