哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展.pdfVIP

维普资讯 第 28卷第 5期 家畜生态学报 Vo1．28No．5 2007年 9月 ActaEcologiaeAnimalisDomastici Sept．2007 哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展 谭秀文，韩 红，吴乃科，张俊功 (1．山东省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽疾病防治与繁育重点实验室，山东 济南 250100) [摘 要] 综述了近年来关于哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展，并对这项技术 的发展前景进行展望。重点讨论了影响哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的几种因素，包括 冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻方法和 卵母细胞所处的发育阶段等，以及冷冻过程 中细胞膜、 微丝、微管、皮质颗粒、纺锤体和线粒体等出现的损伤。目前，玻璃化冷冻法存在的最主要问题 是冷冻过程 中造成超微结构不可逆转的损伤影响胚胎发育，亟待解决。 [关键词] 卵母细胞；玻璃化冷冻；超微结构 [中图分类号] $811．5 [文献标识码] A [文章编号] 1004·5228(2007)05—00104—04 卵母细胞是体积很大、脆弱的球形细胞，并且其 (EG)的毒性较小，但玻璃化形成能力稍差。1，2丙 表面积与体积的比率很小、膜的水传导性很低，采用 二醇(PROH)的玻璃化形成能力较好，但浓度超过 传统的冷冻方法保存效果较差 。而玻璃化冷冻是指 1O％时毒性很大，将其以适当浓度加入其他低温保 溶液在极低的温度 (一196℃)下变为不含任何 内部 护剂，可以增强玻璃化形成能力而没有毒性效应，是 冰晶的固态，可以避免在细胞内形成冰晶，降低低温 较好的玻璃化增强剂 。另外 ，左旋或右旋一2，3一丁 对细胞产生的损伤口]，所以玻璃化冷冻法 自发明以 二醇也具有较好 的玻璃化形成能力和玻璃态稳定 来便成为低温生物学领域的研究热点。但玻璃化冷 性 。 冻法存在的问题是高浓度玻璃化冷冻液不可避免地 Wani等(2004)分别采用 3．5、4、5、6和 7mol／L 会对卵母细胞造成化学毒性损伤和渗透压损伤 ]。 的DMSO、PROH和 EG，并添加 0．5mol／L蔗糖的 因此，科学工作者不断改进冷冻方法，通过加快冷冻 DPBS(含 0．4 BSA)中玻璃化冷冻水牛未成熟卵 一 解冻速度，缩短卵母细胞与玻璃化溶液的接触时 母细胞，解冻后发现，形态正常率上 5、6和 7mol／L 间，以降低其化学毒性和渗透压损伤。尽管如此，玻 组 明显高于3．5和4mol／L组 ，而EG的各浓度组都 璃化冷冻保存卵母细胞 因结果重复性较差[2。]，目 较 DMSO和 PROH各组低。成熟率以7mol／L组 前仍处在试验阶段，未能应用于生产实际中。影响 最高，但都显著低于新鲜卵 。卵裂率上 6和 7mol／L 卵母细胞玻璃化冷冻保存 的因素很多，但主要包括 组显著高于其他各组，同样都低于新鲜卵[5]。说明 冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻方法和卵母细胞所 冷冻保护剂的种类影响卵母细胞的冷冻效果 ，而且 处的发育阶段等。 浓度也是非常关键的因素。浓度过低，所形成 的玻 璃化状态不稳定 ；浓度过高，对细胞的毒性太大 。目 1 冷冻保护剂的种类和浓度 前研究中，多数采用 6mol／LDMSO作为玻璃化冷 保护剂的种类不同，玻璃化形成的能力也有差 冻液 。Maureen等 (1993)采用 6M DMSO玻璃化