大麦条纹花叶病毒北京分离物的鉴定.pdfVIP

维普资讯 第 29卷第 1O期 西 南 大 学 学 报 (自然科学版) 2007年 10月 Vo1．29 NO．10 JournalofSouthwestUniversity(NaturalScienceEdition) oct． 2007 文章编号 ：1673—9868(2007)10—0051—04 大麦条纹花叶病毒北京分离物的鉴定 孙现超 ， 安德荣 ， 青 玲 ， 杨水英 1．西南大学 植物保护学院植物病害检测实验室，重庆 400716；2．西北农林科技大学 植物保护学院，陕西 杨凌 712100 摘要：采集北京田问的大麦感病叶片，室 内分离病原，血清学检测能够与 BSMV新疆株抗血清反应 ，室 内汁液摩 擦接种可侵染大麦、小麦、本明烟和苋色藜，能够种子传毒 ，电镜观察病毒粒子为杆状 ，同时，国内首次利用 RT_ PCR扩增出597bp的BSMV外壳蛋 白基因．根据 以上结果确定分离到的病毒为大麦条纹花叶病毒，其寄主范围和 种子带毒率与新疆株系有差别，可能属于不同株 系． 关 键 词 ：大麦条纹花叶病毒 ；鉴定；株系；R，r_PCR 中图分类号 ：s435．123 文献标识码 ：A 大麦条纹花叶病毒 (Barleystripemosaicz)irus，BSMV)属大麦病毒属 (Hordeivirus)，为该属的代表 成员，该病毒在世界范围内广泛分布，曾严重影响世界大麦的产量．在我 国，BSMV 曾在新疆等地大面积 流行，并传播到全国大部分地区，给小麦生产造成了巨大损失．该病毒有不同的株系，不同来源地的株系 间存在着传毒特性和寄主范围的差异u．近几年国内对该病毒的研究报道较少 ，我们在进行病毒调查过程 中发现类似感染 BSMV症状的大麦植株，采集病株叶片，经血清学、生物学、病毒粒子观察及分子生物学 鉴定，确定其为大麦条纹花叶病毒． 1．1 毒源和种子 大麦条纹花叶病毒于 2004年 3月采 自北京郊区大麦 田，一8O℃冻存 ；供试鉴别寄主植物种子均 由本 实验室保存． 1．2 生化试剂 高保真 ExTaqTM DNA聚合酶购 自大连宝生物工程公司；反转录酶购 自博大泰克生物公司；BSMV 抗血清由中国科学院微生物研究所邱并生研究员制备提供 ；辣根过氧化酶标记的 IgG羊抗兔抗体购 自鼎国 生物技术公司；其他试剂均为国产分析纯． 1．3 BSMV的血清学检测 用BSMV新疆株的抗血清对 田问采集到的感病叶子进行血清学检测，具体方法采用间接 ELISA(en— zyme—linkedimmunosorbantassay，ELISA)． 1．4 病毒的寄主范 围和种子带毒率测定 用汁液摩擦法接种室内培养 1周的大麦 、小麦 ，四叶期的本明烟 、普通烟 、苋色藜、黄瓜和豇豆等 15 种常用鉴别寄主植物．接种后在平均温度为 25℃条件下培养至出现症状．收集接种 BSMV大麦的下一代 种子 ，室内种植 ，观察症状并用问接 ELISA法检测每株大麦叶片． 1．5 病毒粒子的粗提和电镜观察 用甘氨酸碱法提取BSMV-CH病毒粒子，提取缓冲液中各组分含量为：0．1M甘氨酸，0．01M KC1．用 收稿 日期 ：2007—06—22 基金项 目：重庆市自然基金资助项 目(CSTC．2007BB1349)}西南大学博士启动基金资助项 目(SWUB2OO6O42)；西南大学博士后基金资 助项 目． 作者简介 ：孙现超 (1977一)，男，河南许昌人，博士，副教授 ，主要从事植物病毒学及微生物药物研究． 维普资讯 52 西南大学学报 (自然科 学版) 第 29卷 NaOH调节 pH至 8．5．具体步骤如参考文献心]．用碳膜处理过的铜网蘸取病毒粗提液 ，在 29／6醋酸双氧铀 (296／，pH 4．2)中染色 1～3min，晾干 ，进行电子显微镜观察． 1．6 BSMV的RT-PCR检测 感染 BSMV大麦叶片总