肥大细胞对布鲁菌模式识别与应答效应的体外研究.pdf

密 级： 分 类 号： 学校代码：10075 学 号 肥大细胞对布鲁菌模式识别与应答效应 的体外研究 学位申请人 ： 闫伟娇 指导教师： 曹志然 教授 学位类别： 医学硕士 学科专业： 药理学 授予单位： 河北大学 答辩日期： 二〇一四年五月 U.D.C.: CODE:10075 ClassifiedIndex: NO ADissertationfortheDegreeofM. edicine Studyonthepatternrecognitionand responseeffectofmastcelltoB.suisin vitro Candidate: Wei-jiaoYan Supervisor: Prof.Zhi-ranCao AcademicDegreeAppliedfor: Masterofmedicine Specialty: Pharmacology University: HebeiUniversity DateofOralExamination: May,2014 摘要 I 摘要 II 摘要 摘 要 目的： 为研究肥大细胞对布鲁菌的模式识别与免疫应答效应，进一步阐明布鲁菌病的发病 机制，为布鲁菌病的治疗和疫苗研发探索新途径与新方法。 方法： 1．分别用布鲁菌S菌株、WboA S菌株和大肠杆菌以MOI50:1感染肥大细胞，分别2 - 2 1h 12h 24h ELISA IL-6 TNF-α LT IL-1β 在感染后 、 和 时收集上清， 方法测上清中 、 、 、 、组 胺、类胰蛋白酶、IL-12、IFN-γ的含量，以未处理的肥大细胞为对照。 2 RT-PCR TLR2 8 9mRNA ． 法检测正常肥大细胞 、 、 与 的表达。 3．分别用布鲁菌S菌株、WboA S菌株和大肠杆菌以MOI50:1 感染肥大细胞，在2 - 2 感染后1h、12h和24h时收集细胞，RT-PCR法测细胞TLR 、8与9mRNA的表达。 ．用RNAi技术沉默肥大细胞TLR ，并设未沉默对照组，用RT-PCR法和流式细胞 术检测其沉默效果。 5. 分别用布鲁菌S菌株、WboA S菌株和大肠杆菌以MOI50:1感染沉默组与未沉默2 - 2 1h 12h 24h ELISA IL-6 TNF-α 组肥大细胞，分别在感染后 、 和 时收集上清， 方法测上清中 、 、 LT与组胺的含量。 结果： 1．布鲁菌S 菌株、WboA S 菌株和大肠杆菌感染肥大细胞，1h、12h、24h感染组2 - 2 IL-6含量明显高于正常组（P0.05），且随着感染时间的延长，IL-6含量呈增加趋势。 S 菌株感染组IL-6含量与WboA S 菌株感染组IL-6含量比较无统计学意义（P ﹥0.05）。- 2 2 2．布鲁菌S 菌株、WboA S 菌株和大肠杆菌感染肥大细胞，1h感染组TNF-α含量2 - 2 与正常组相比无统计学意义（P ﹥0.05），