树突状细胞疫苗影响hu-PBL-SCID鼠膀胱癌淋巴结微转移实验研究.pdfVIP

山西医辩大学焉士掌位论文 树突状细胞疫苗影响hu．PBL．SCID鼠膀胱癌 淋巴结微转移的实验研究 摘要 第一部分人膀胱癌细胞株高侵袭性亚群的体外筛选 目的：利用体外模型筛选人侵袭性膀胱癌细胞株T24的高侵袭性亚群，并观察其体外 侵袭能力与运动能力的变化。 方法：采用改良的Boyden小室侵袭实验方法，在体外经三次，筛选出人侵袭性膀胱 体外生长曲线，用改良的Boyden小室比较这两种细胞的体外侵袭能力与体外运动能力， 荧光定量RT-PCR检测两种细胞的MMP．7mRNA表达水平。 结果：1 经过三次筛选，获得子代细胞T24．III细胞，与母代细胞T24的形态特征、 细胞状态及所需的体外培养环境均无明显差异： 天，T24细胞的体外增殖能力略强于124．IIh 3 侵袭膜的背面，只有小部分细胞脱离侵袭膜(p0．001)； 4 化性运动能力明显强于其母代细胞T24(pO．001)； 5细胞体外侵袭力与体外趋化性运动能力呈正相关，F=44．789，”』=1，132=17， p0．001。标准化相关系数为0．858，t：6．692，v=16，p0．001； 6 11．2905，前者的均数较后者有升高趋势，但其差别无统计学意义(p=O．08)。 结论：本实验用改良的Boydell小室侵袭实验成功地筛选出了人侵袭性膀胱癌细胞株 两种细胞的体外侵袭力与体外趋化性运动能力呈正相关；体外培养条件下，二者的 MMP7mRNA表达水平无明确差异。 MMP．7 关键词：Boyden小室，T24， 第二部分hu-PBL．SCID鼠膀胱癌模型的建立及其生物学特性观察 目的：建立人外周血淋巴细胞免疫重建的SCID鼠膀胱癌淋巴道转移模型，观察体外 筛选获得的人膀胱癌细胞株高侵袭性亚群T24．III细胞与其母代细胞T24的体内侵袭与转移 山蘸辩大学硕士学位论立 情况，并评价该模型用于DCs疫苗干预膀胱癌淋巴结微转移的可行性。 asialo 胞组与T24细胞组，都经腹腔注射兔AntiGMl，再将密度梯度离心法分离的健康人 外周血淋巴细胞，以4×107个·只“的剂量，经腹腔注射，并在小鼠的右后肢大腿内侧皮 鼠，于第4、5周末每组各处死4只鼠。处死鼠时，观察鼠的各脏器大体解剖，取外周血、 脾脏、瘤体、右侧腹股沟淋巴结、右侧髂血管旁淋巴结+右侧肾门淋巴结。用ELISA法检 胞：称瘤重，一半瘤体作普通病理检查，另一半用于RT．PCR检测；淋巴结标本分为两组， 一组为腹股沟淋巴结、另一组为髂血管旁淋巴结与肾门淋巴结，各组标本一半作普通病理 荧光定量法检测了人CK20mRNA与人GAPDHmRNA的表达。 3周后， 结果：1两组小鼠成瘤率均为100％，第l周到第3周，瘤体生长缓慢， 瘤体生长快速。从接种癌细胞到全部处死，各鼠体重无明显变化： 2只与4只、2只与4只；所有鼠都未见全身各脏器大体转移灶及淋巴结肿大，而且淋巴 结普通病理切片均未见癌细胞； 3所有小鼠血清中均可检出人IgG，人]gG在重建后第2周末即存在，在第4周末与 第5周末仍有较高表达。将数据进行单因素方差分析，不能确定第2周末、第4周末及第 5周末SCID鼠血清中人IgG表达水平不同(口0．05)； 4 例，于第2周末、第4周末与第5周末均有一定表达，不能确定其表达水平随时间的变化 而变化(pO．05)。 胞的12．5％(PO．05)。 6 7瘤体MMP．7mRNA表达水平与肿瘤的侵袭范围呈正相关，其标准化回归系数为 0．571，P=-0．009。 表达无明确差异；MMP．7mRNA的表达水平与肿瘤的侵袭范围呈正相关；用健康人外周血 鼠膀胱癌淋巴结转移模型于第5周末出现较高水平的淋巴结微转移。